[發明專利]綠原酸在激活機體的WNT信號通路中的用途及其研究方法

在審

• 申請號: 201510568285.3
• 申請日: 2015-09-09
• 公開（公告）號: CN105147657A
• 公開（公告）日: 2015-12-16
• 發明（設計）人: 張潔;朱麗娜
• 申請（專利權）人: 四川九章生物科技有限公司
• 主分類號: A61K31/216
• 分類號: A61K31/216;A61K48/00;A61P37/04;A61P35/00
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產權代理有限公司 51214
• 代理人: 曾曉波

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，具體涉及綠原酸在激活機體的WNT信號通路中的用途及其研究方法。

技術背景

綠原酸(chlorogenicacidCGA)又名咖啡鞣酸，是由咖啡酸(caffeicacidCA)和奎尼酸(quinicacidQA)組成的縮酚酸，其化學名為3-o-咖啡酰奎尼酸(3-o-caffeoylquinicacidCGA)。綠原酸是植物在進行有氧呼吸的過程中，經磷酸戊糖途徑中間產物合成的一種苯丙素類物質。綠原酸已經被開放應用于食品，保健品，化妝品和藥品等多個領域。由于它廣泛的存在于常見的各種蔬菜水果中，具有多種生物活性，如:心血管保護作用、抗氧化作用、抗紫外及抗輻射作用、抗誘變及抗癌作用、抗菌作用、抗病毒作用、降脂降糖作用、免疫調節作用等。在醫藥化工和食品等領域都具有廣泛的應用。目前已有大量證據顯示綠原酸具備抗癌功能，然而，目前為止綠原酸抗癌功能的分子學作用機制尚不明確，從而限制了人們從分子和基因層面對其抗癌機理相關的信號通路、精確的作用靶點、具體生物因子的準確把握和應用。

發明內容

針對上述問題，本發明提供了綠原酸的一種從基因和分子水平調控機體WNT信號通路新用途，即綠原酸在激活機體的WNT信號通路中的用途，建立了WNT信號通路與綠原酸抗癌功能之間的分子學聯系，提供了一種通過綠原酸精確調控機體WNT信號通路的方法。通過該應用可進一步用于指導腫瘤的治療，也可以用于建立相關的研究模型用于對WNT信號通路的具體作用原理或其他相關的應用。

進一步的，所述機體為患癌機體，更進一步的為荷瘤小鼠。

進一步的，在上述應用中通過上調基因GSK-3β和APC的表達來激活WNT信號通路。

進一步的，還同時下調β-Catenin基因的表達。

作為可選方式，在上述用途中，將綠原酸制作成含有效劑量的藥物制劑后施用于機體。

作為可選方式，在上述用途中，所述綠原酸的使用劑量為：1-100mg/kg。優選為20～40mg/kg。

作為可選方式，所述的藥物制劑是以綠原酸為有效成分，加入一種或多種藥學上可接受的藥用賦形劑制備而成的制劑。

作為可選方式，所述的藥物中每制劑單位含有綠原酸1～3000mg。

作為可選方式，所述的藥物是口服制劑、注射制劑或外用透皮給藥制劑。

作為可選方式，所述的藥物是綠原酸濃度為1～40mg/mL的生理鹽水注射液。也可選擇其他藥學上可接受的注射液。

本發明還提供了一種綠原酸激活機體WNT信號通路的分子機制的研究方法，包括以下步驟：

(1)建立動物模型；

(2)采用綠原酸對模型動物進行干預作為實驗組，同時建立對照組；

(3)采用基因芯片技術獲得實驗組和對照組中的差異表達基因；

(4)采用時間序列分析、基因功能分類分析(GO)和信號通路分析篩選出相關的基因；

(5)采用ELISA技術或分子印記檢測(westernblottest)技術或PCR技術對步驟(4)篩選出的基因進行驗證。

采用目前的基因芯片對模型動物的基因表達進行分析時，由于方法本身的系統誤差和隨機誤差(如RNA的提取、反轉錄、雜化過程中產生的誤差以及基因芯片和RNA質量的影響等)會在一定程度上影響分析結果的準確性，該方法雖然可以快速基因表達的差異但由誤差導致的假陽性結果的可能性也很大，本發明通過將基因芯片技術分析獲得的差異表達基因與pathway(信號傳導通路)和GO(geneontology)兩個指標來進行分析和相互驗證，將差異基因控制在研究目標相關功能基因的范圍內有助于高效準確地篩選出目標基因，同時采用ELISA技術或分子印記檢測(westernblottest)技術或PCR技術對步驟(4)中篩選出的基因進行驗證，可有效避免假陽性，提升結果的可信度。

作為可選方式，所述步驟(1)中的動物模型為小鼠EMT-6乳腺癌動物模型，本領域技術人員也可根據研究需要和實際情況靈活選擇其他動物模型。

作為可選方式，所述步驟(2)中的對照組可以包括陽性對照、陰性對照、空白對照，本領域技術人員可根據研究需要和實驗對照的公知設計原理進行靈活的選擇。例如，所述對照組可以包括多烯紫杉醇干預組、干擾素干預組和生理鹽水空白對照組。