[發(fā)明專利]抑制TNFα的穩(wěn)定和可溶的抗體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510565842.6
• 申請(qǐng)日: 2006-06-06
• 公開（公告）號(hào): CN105153306B
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: S·埃韋特;A·巴爾貝里斯;D·M·烏雷奇;A·奧夫德莫爾;P·利希特萊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 艾斯巴技術(shù)-諾華有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C07K16/24
• 分類號(hào): C07K16/24
• 代理公司: 中國貿(mào)促會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 11038
• 代理人: 李程達(dá)

本發(fā)明特別地涉及對(duì)TNFα特異性的穩(wěn)定和可溶的scFv抗體和Fab片段，其包含特異性輕鏈和重鏈序列，這些序列針對(duì)穩(wěn)定性、可溶性、體外和體內(nèi)與TNFα的結(jié)合性以及低免疫原性被優(yōu)化。所述抗體被設(shè)計(jì)用于診斷和/或治療與TNFα相關(guān)的紊亂。還公開了表達(dá)本發(fā)明重組抗體的核酸、載體和宿主細(xì)胞，分離它們的方法和所述抗體在藥物中的應(yīng)用。

本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?00680028415.3、申請(qǐng)日為2006年6月6日、發(fā)明名稱為“抑制TNFα的穩(wěn)定和可溶的抗體”的中國專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及優(yōu)化的抗體和抗體衍生物，其與腫瘤壞死因子α(TNFα)結(jié)合并阻斷其功能，并具有診斷和/或治療、預(yù)防或改善與TNFα相關(guān)的疾病的用途；它們的編碼序列、生產(chǎn)和在藥理學(xué)上合適的組合物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

腫瘤壞死因子α(TNFα，亦稱惡液質(zhì)素)是天然存在的哺乳動(dòng)物細(xì)胞因子，由許多類型細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素或其他刺激物應(yīng)答產(chǎn)生，包括單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。TNFα是炎癥、免疫和病理生理反應(yīng)的主要介質(zhì)(Grell,M.,等(1995)Cell,83:793-802)。

可溶TNFα由跨膜蛋白前體切割形成(Kriegler,等(1988)Cell53:45-53)，分泌的17kDa多肽裝配成可溶同源三聚體復(fù)合物(Smith,等(1987),J.Biol.Chem.262:6951-6954；對(duì)于TNF的綜述,參見Butler,等(1986),Nature 320:584；Old(1986),Science 230:630)。然后這些復(fù)合物與各種細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的受體結(jié)合。這種結(jié)合產(chǎn)生一系列促炎作用，包括(i)釋放其他促炎細(xì)胞因子，如白介素(IL)-6、IL-8和IL-1，(ii)釋放基質(zhì)金屬蛋白酶和(iii)上調(diào)內(nèi)皮粘附分子的表達(dá)，通過吸引白細(xì)胞進(jìn)入血管外組織而進(jìn)一步放大炎癥和免疫級(jí)聯(lián)。

許多紊亂與TNFα水平升高有關(guān)，其中很多具有顯著的醫(yī)學(xué)重要性。已經(jīng)證明TNFα在很多人類疾病中被上調(diào)，包括慢性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)，炎性腸紊亂包括克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎，膿毒病，充血性心力衰竭，支氣管哮喘和多發(fā)性硬化。人TNFα轉(zhuǎn)基因小鼠組成型產(chǎn)生高水平TNFα并發(fā)展為類似RA的自發(fā)、有害的多關(guān)節(jié)炎(Keffer等1991,EMBOJ.,10,4025-4031)。因此TNFα被稱為促炎細(xì)胞因子。

現(xiàn)在TNFα已被充分確立為RA發(fā)病機(jī)理中的關(guān)鍵因素，RA是慢性、進(jìn)行性和使人衰弱的疾病，其特征是多關(guān)節(jié)炎癥和破壞，伴發(fā)熱、不適和疲勞的全身癥狀。RA還引起慢性滑膜炎，經(jīng)常進(jìn)展為關(guān)節(jié)軟骨和骨破壞。在遭受RA的患者的滑膜液和外周血液中都發(fā)現(xiàn)TNFα水平增加。當(dāng)將TNFα阻斷劑給予遭受RA的患者時(shí)，它們減輕炎癥、改善癥狀和延遲關(guān)節(jié)損害(McKown等(1999),Arthritis Rheum.42:1204-1208)。

在生理學(xué)上，TNFα還與保護(hù)不受特殊感染的危害相關(guān)(Cerami.等(1988),Immunol.Today 9:28)。TNFα由被革蘭氏陰性細(xì)菌的脂多糖激活的巨噬細(xì)胞釋放。這樣，TNFα可能是與細(xì)菌膿毒病相關(guān)內(nèi)毒素性休克的發(fā)展和發(fā)病機(jī)理中涉及的中心環(huán)節(jié)的內(nèi)源介質(zhì)(Michie,等(1989),Br.J.Surg.76:670-671.；Debets.等(1989),Second Vienna ShockForum,p.463-466；Simpson,等(1989)Crit.Care Clin.5:27-47；Waage等(1987).Lancet1:355-357；Hammerle.等(1989)Second Vienna Shock Forum p.715-718；Debets.等(1989),Crit.Care Med.17:489-497；Calandra.等(1990),J.Infect.Dis.161:982-987；Revhaug等(1988),Arch.Surg.123:162-170)。