[發明專利]一種乳腺癌靶向多肽偶聯阿霉素的制備及應用

在審

• 申請號: 201510564401.4
• 申請日: 2015-09-07
• 公開（公告）號: CN105085635A
• 公開（公告）日: 2015-11-25
• 發明（設計）人: 鄭學敏;龔珉;孔維苓;黃長江;袁靜;徐為人
• 申請（專利權）人: 天津藥物研究院有限公司
• 主分類號: C07K7/64
• 分類號: C07K7/64;C07K1/04;C07K1/06;C07K1/10;A61K47/48;A61K47/42;A61K31/704;A61P35/00
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技術領域：本發明涉及腫瘤相關的藥物領域，具體而言，本發明涉及一種環形多肽與阿霉素連接形成一種新的藥物，該多肽本身不具有生理活性，但是具有靶向的作用，本發明還涉及該多肽的制備方法及其應用。

技術背景：

根據腫瘤細胞中分子的生物學特征與正常細胞中分子生物學特征的區別而研發的藥物統稱為分子靶向藥物，是隨著當代分子生物學、細胞生物學的發展產生的高科技藥物。靶向藥物治療癌癥，不僅效果好，而且副作用要比常規的化療方法小得多。使用靶向藥物的治療方法稱為靶向治療(targetedtherapy)。

阿霉素是一種抗腫瘤抗生素，可抑制RNA和DNA的合成，對RNA的抑制作用最強，抗瘤譜較廣，對多種腫瘤均有作用，屬周期非特異性藥物，對各種生長周期的腫瘤細胞都有殺滅作用。對機體可產生廣泛的生物化學效應，具有強烈的細胞毒性作用。

目前關于阿霉素的改造很多，本專利的目的是通過小分子多肽與阿霉素連接得到乳腺癌靶向的藥物。

發明內容

以下是本發明的詳細描述：

(1)本發明所述的靶向環肽

本發明所述的靶向多肽，由9個氨基酸組成的環形多肽，而且是親水性和疏水性交替組合的，所述的靶向肽序列為下述所示的氨基酸序列：

SEQ:CRGDKGPDC

其中N末端的半胱氨酸和C末端的半胱氨酸通過二硫鍵連接成環。

(2)本發明所述的靶向多肽的制備方法

本發明所需多肽是采用固相的方法制備的，固相合成是以固相載體樹脂為載體，從C端即羧基端向N端即氨基端逐漸添加氨基酸的過程。

本發明中優選樹脂：Fmoc-wang樹脂、2-cl-trt樹脂，樹脂取代度0.5～1。

本發明所使用的保護氨基酸為：Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Arg(pbf)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asp-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Phe-OH反應過程中保護氨基酸3倍以上過量。

本發明所使用的脫保護試劑為：哌啶/N,N-二甲基甲酰胺，比例為30:70。

本發明所使用的偶聯試劑為：①苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽/1-羥基苯并三唑(HOBT)，②2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯/1-羥基苯并三唑(HOBT),③N,N'-二異丙基碳二亞胺/1-羥基苯并三唑(HOBT)。

本發明中，若使用第①或者第②種偶聯試劑，那么反應中過程中應添加縛酸劑：DIEA/NMP。

本發明中所使用的切割試劑為：TFA/茴香硫醚/水/苯酚/1,2-乙二硫醇，比例為：82.5:5:5:5:2.5。

切割后經乙醚沉淀，沉淀體積為切割劑的5～10倍，攪拌促進沉淀。

本發明中所使用MS-IT-TOF確定分子量，使用HPLC純化粗肽。

本發明中靶向多肽的成環方法為：空氣氧化法。

將純化后的多肽溶于水中，濃度1mg/ml，在弱堿性條件下(pH值8.4)，采用空氣自然氧化，反應時間24小時。凍干得純品備用。

(3)本發明所述的環形多肽與阿霉素的連接方法

1)化合物II的合成

50m反應瓶中加入1.00g(1.72mmol)阿霉素，0.52g(5.20mmol)丁二酸酐，30mlTHF，滴加0.66g(5.12mmol)N,N-二異丙基乙胺(DIEA)，27℃攪拌6h，蒸干溶劑得蠟狀物，加水攪拌，有黃色固體析出，抽濾，水洗兩次，干燥，得黃色固體1.15g。

2)化合物I的合成

50m反應瓶中加入0.22g(0.32mmol)化合物II，0.10g(0.31mmol)O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯(TBTU)，5mlDMF，氮氣保護，滴加0.08g(0.62mmol)N,N-二異丙基乙胺(DIEA)，27℃攪拌1h后，加入0.10g多肽，27℃攪拌3h后，終止反應。

附圖說明

以下，結合附圖來詳細說明本發明的實施方案，

圖1：環肽純化后分析圖

圖2：環肽偶聯阿霉素后對乳腺癌靶向作用圖

具體實施方式

實施例1:多肽的固相合成