[發明專利]一種快速檢測蛋白酶Jmjd6與量子點結合速率的方法

有效

• 申請號: 201510560830.4
• 申請日: 2015-09-06
• 公開（公告）號: CN105181664B
• 公開（公告）日: 2018-12-04
• 發明（設計）人: 王建浩;李進晨;陳瑤;滕一萬;蔣鵬舉;邱琳;王車禮;張晨澄;楊麗;顧亞琴;劉菲菲;董冰玉
• 申請（專利權）人: 常州大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種基于熒光毛細管電泳技術快速檢測毛細管內重組蛋白酶Jmjd6與量子點結合速率的方法，屬于納米生物分析技術領域。其特征在于含有六聚組氨酸標簽的重組精氨酸甲基轉移蛋白酶(Histag?Jmjd6)與量子點(QDs)在毛細管內相互作用，按摩爾比例8:1在毛細管內進樣相同時間，通過控制進樣時間來改變進樣量，用熒光毛細管電泳檢測兩者之間的組裝和結合速率。該方法可以準確、快速、靈敏的檢測蛋白酶Jmjd6與量子點的結合速率，并且操作簡單、重復性好，進一步拓寬了量子點在生物分析中與生物大分子之間結合檢測的應用。

技術領域

本發明涉及納米生物分析技術領域，具體涉及一種快速檢測蛋白酶Jmjd6與量子點結合速率的方法。

背景技術

納米科學近年來發展快速，出現了很多新型的納米材料。其中量子點(Quantumdots，QDs)由于具有熒光激發譜寬、發射譜窄而對稱、發射波長可調、光化學穩定性好等光學性質，這些優點彌補了傳統熒光探針的不足，逐漸使其在生物分析檢測方面得到了廣泛應用。

近年來，金屬和六聚組氨酸多肽之間的自組裝作為一種高效、定點檢測方法已被開發，其是通過金屬親和驅動相互作用來使量子點表面功能化。這種結合具有很高的親和力，解離常數(K_d)約10^-9M，并且QD-寡聚組氨酸(Histag)多肽的偶聯已廣泛應用于納米生物傳感器的自組裝。研究表明，Histag可以與量子點進行有效自組裝。例如，QDs偶聯抗體可用于抗原的檢測；QDs與多肽偶聯可用于水解酶的檢測等。此外，帶有寡聚組氨酸標簽的生物分子和量子點偶聯可以通過兩者的摩爾比來控制。因此，含有Histag的生物分子可直接與量子點在水溶液中組裝，避免使用有機交聯劑完成結合步驟。

酶是催化生物反應的關鍵，Jmjd6是最近發現的一種依賴于Fe(Ⅱ)和α-酮戊二酸的雙加氧酶，其在小鼠體內缺乏會胚胎致死。通常固定在納米顆粒表面的酶具有特殊應用，利用納米顆粒作為載體(包括量子點，氧化鐵，聚苯乙烯，納米金等)，對酶活性均有顯著提高，其中量子點更具有優勢，效果極為明顯。

本發明研究了一種基于熒光毛細管電泳技術(CE-FL)快速檢測重組蛋白酶Jmjd6與量子點結合速率的方法。Jmjd6酶與QDs按摩爾比例8:1在毛細管內進樣相同時間，通過控制進樣時間來改變進樣量，用熒光毛細管電泳檢測兩者之間的組裝，并線性擬合計算結合速率。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：一種快速檢測蛋白酶Jmjd6與量子點結合速率的方法，拓寬其在生物分析領域中的應用。

為解決上述技術問題，本發明提供了一種根據毛細管電泳峰面積之比的方法檢測蛋白酶Jmjd6與量子點的結合速率，該方法穩定性好，重復性高，可以方便快速地得到蛋白酶Jmjd6與量子點的結合速率。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：一種快速檢測蛋白酶Jmjd6與量子點結合速率的方法，包括以下步驟：(1)將脂溶性QDs經不同巰基配體穩定轉換為水溶性QDs，提高QDs在水溶液中的穩定性，(2)設計含有六聚組氨酸標簽的重組蛋白，并通過大腸桿菌原核表達純化，(3)Jmjd6酶與QDs按摩爾比例8:1在毛細管內進樣相同時間，通過控制進樣時間來改變進樣量，用熒光毛細管電泳檢測兩者之間的組裝和結合速率。

步驟(3)所述的熒光毛細管電泳檢測為含有六聚組氨酸標簽的重組精氨酸甲基轉移酶(Jmjd6)與QDs在毛細管內自組裝，分離，熒光檢測。

本發明所述的量子點為含有Zn的量子點，如CdSe/ZnS、CdTe/ZnS、CdSe/ZnSe或者CdTe/ZnSe等，并采用GSH表面功能化QDs，使油溶性量子點轉為水溶性，提高了QDs在水溶液中的穩定性。