[發(fā)明專利]絲膠蛋白包裹的絲膠/介孔硅復(fù)合型載藥納米顆粒的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510560758.5
• 申請(qǐng)日: 2015-09-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105148286B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-08-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王琳;王征;劉佳;李琪琳;徐魯明;乞超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61K47/04
• 分類號(hào): A61K47/04;A61K47/42;A61K45/00;A61K49/00;A61P35/00
• 代理公司: 武漢天力專利事務(wù)所42208
• 代理人: 程祥

1.絲膠蛋白包裹的具有pH/蛋白酶雙重響應(yīng)的絲膠/介孔硅復(fù)合型載藥納米顆粒的制備方法，其包括以下步驟：

（1）稱取蠶繭，用高溫堿提法提取絲膠蛋白，溶解后的絲膠液再經(jīng)過(guò)3500 Da的透析袋透析、凍干即得到純絲膠蛋白固體；其中所述的高溫堿提法是將剪碎后的蠶繭浸沒(méi)在0.01-0.05M的碳酸鈉溶液中，100攝氏度溶解30-60分鐘；

（2）利用溶膠凝膠及表面活性劑模板法制備介孔硅納米顆粒；

（3）將步驟（2）中所得介孔硅納米顆粒分散于甲醇中，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，反應(yīng)得到表面氨基化的介孔硅納米顆粒；

（4）將步驟（3）中的表面氨基化的介孔硅納米顆粒置于甲醇和鹽酸的混合液中回流洗脫模板，洗脫模板后離心即得到具有規(guī)則孔道的氨基化介孔硅納米顆粒；

（5）將步驟（4）中的具有規(guī)則孔道的氨基化介孔硅納米顆粒分散于濃度為2.5wt%的戊二醛水溶液中，室溫避光攪拌24小時(shí)，而后離心收集產(chǎn)物，然后用雙蒸水清洗多次后，得到醛基化的介孔硅納米顆粒；其中氨基化介孔硅納米顆粒與戊二醛水溶液的質(zhì)量體積比為100 mg : 10 mL；

（6）將步驟（4）中所得的氨基化介孔硅納米顆粒或步驟（5）中所得的醛基化介孔硅納米顆粒與藥物混合反應(yīng)，得到負(fù)載藥物的氨基化或者醛基化介孔硅納米顆粒；

（7）通過(guò)負(fù)載藥物的醛基化介孔硅納米顆粒中表面的醛基與步驟（1）得到的純絲膠蛋白上的氨基反應(yīng)，或直接利用靜電作用將絲膠蛋白包裹在氨基化介孔硅納米顆粒表面，即得到絲膠蛋白包裹的具有pH/蛋白酶雙重響應(yīng)的絲膠/介孔硅復(fù)合型載藥納米顆粒；其中所述通過(guò)負(fù)載藥物的醛基化介孔硅納米顆粒中表面的醛基與步驟（1）得到的純絲膠蛋白上的氨基反應(yīng)的具體步驟如下：將步驟（1）得到的純絲膠蛋白固體加水制備成5 - 10 mg/mL絲膠蛋白水溶液，將絲膠蛋白水溶液加入步驟（6）所得的負(fù)載藥物的醛基化介孔硅納米顆粒中，避光35攝氏度攪拌6-7小時(shí)；而后離心收集產(chǎn)物；然后用雙蒸水沖洗產(chǎn)物，置于冷凍真空干燥機(jī)中凍干即獲得粉末狀的納米顆粒，其中介孔硅納米粒與純絲膠蛋白的質(zhì)量比為1 : 0.5 – 1 : 2。

2.絲膠蛋白包裹的具有還原/蛋白酶雙響應(yīng)的絲膠/介孔硅復(fù)合型載藥納米顆粒的制備方法，其包括以下步驟：

（1）稱取蠶繭，用高溫堿提法提取絲膠蛋白，溶解后的絲膠液再經(jīng)過(guò)3500 Da的透析袋透析、凍干即得到純絲膠蛋白固體；其中所述的高溫堿提法是將剪碎后的蠶繭浸沒(méi)在0.01-0.05M的碳酸鈉溶液中，100攝氏度溶解30-60分鐘；

（2）利用溶膠凝膠及表面活性劑模板法制備介孔硅納米顆粒；

（3）將步驟（2）中所得介孔硅納米顆粒根據(jù)質(zhì)量體積比1 g : 83 mL分散于甲醇中，加入巰丙基三甲氧基硅烷，即得到巰基化的介孔硅納米顆粒；其中甲醇與巰丙基三甲氧基硅烷的體積比為36 : 1；

（4）將步驟（3）中的200 mg巰基化的介孔硅納米顆粒分散于30 mL甲醇中，加入200 mg（2-氨基乙?guī)€基）-2-巰基吡啶，室溫?cái)嚢?4小時(shí)后，離心收集產(chǎn)物，用甲醇和雙蒸水清洗數(shù)次后凍干，得到雙硫化的介孔硅納米顆粒；

（5）將步驟（4）中的雙硫化介孔硅納米顆粒置于甲醇和鹽酸的混合液中回流，洗脫模板后即得到具有規(guī)則孔道的雙硫化介孔硅納米顆粒；

（6）將步驟（5）得到的具有規(guī)則孔道的雙硫化介孔硅納米顆粒與藥物混合反應(yīng)，即可得到負(fù)載藥物的雙硫化介孔硅納米顆粒；

（7）將步驟（6）得到的負(fù)載藥物的雙硫化介孔硅納米顆粒表面的氨基與步驟（1）得到的純絲膠蛋白上的羧基反應(yīng)，使得絲膠蛋白包裹于介孔硅納米粒表面，即得到絲膠蛋白包裹的具有還原/蛋白酶雙響應(yīng)的絲膠/介孔硅復(fù)合型載藥納米顆粒；所述將負(fù)載藥物的雙硫化介孔硅納米顆粒表面的氨基與步驟（1）得到的純絲膠蛋白上的羧基反應(yīng)具體步驟如下：將步驟（1）得到的純絲膠蛋白固體加水制備成5 - 10 mg/mL絲膠蛋白水溶液，依次加入1-?(3-?二甲氨基丙基)?-?3-?乙基碳二亞胺鹽酸鹽，N-羥基丁二酰亞胺，室溫反應(yīng)2-3小時(shí)后，將該溶液加入步驟（6）所得的負(fù)載藥物的雙硫化介孔硅納米顆粒中，避光35攝氏度反應(yīng)6 - 24小時(shí)；而后離心收集產(chǎn)物；然后用雙蒸水沖洗產(chǎn)物，置于冷凍真空干燥機(jī)中凍干即獲得粉末狀的天然絲膠蛋白包裹的具有還原/蛋白酶雙響應(yīng)的絲膠/介孔硅復(fù)合型載藥納米顆粒；絲膠蛋白與1-?(3-?二甲氨基丙基)?-?3-?乙基碳二亞胺鹽酸鹽的質(zhì)量比為1 : 6，絲膠蛋白與N-羥基丁二酰亞胺的質(zhì)量比為1 : 3，介孔硅納米粒與純絲膠蛋白的質(zhì)量比為2 : 1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于：所述藥物為抗癌藥物、激素或抗生素。