[發(fā)明專利]一種抗含氯消毒劑細(xì)菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510560746.2
• 申請(qǐng)日: 2015-09-06
• 公開（公告）號(hào): CN105177106A
• 公開（公告）日: 2015-12-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何艷玲;孫萬東;王杰偉;吳艷輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): C12Q1/06
• 分類號(hào): C12Q1/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于微生物檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種抗含氯消毒劑細(xì)菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基。

背景技術(shù)：

在食品和水的生產(chǎn)過程中，為了使產(chǎn)品達(dá)到衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，必須對(duì)生產(chǎn)線上的設(shè)備及管道、原輔料和包裝材料等進(jìn)行消毒處理。消毒劑對(duì)微生物有明顯的殺滅和抑制作用，能控制污染食品和水中微生物的繁殖，防止食品和水的變質(zhì)。但在進(jìn)行檢驗(yàn)時(shí)，產(chǎn)品中殘留的消毒劑會(huì)對(duì)微生物檢測(cè)造成嚴(yán)重干擾，即使樣品中含有致病微生物，使用常規(guī)培養(yǎng)基卻不能檢出，從而作為合格產(chǎn)品進(jìn)入市場(chǎng)，而經(jīng)過一定期限或遇到適宜的環(huán)境后，被抑制的菌就會(huì)復(fù)蘇、生長(zhǎng)、繁殖，導(dǎo)致食品和水變質(zhì)，直接影響廣大消費(fèi)者的身體健康。目前相關(guān)企業(yè)所使用的消毒劑中以含氯類消毒劑最為廣泛，因此研制抗含氯消毒劑培養(yǎng)基，最大限度地消除含氯消毒劑對(duì)微生物檢測(cè)的影響，提高微生物檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性，使?jié)撛诘牟缓细癞a(chǎn)品不致流入市場(chǎng)，為生產(chǎn)廠家提高產(chǎn)品質(zhì)量提供強(qiáng)有力的檢測(cè)工具，進(jìn)一步提高食品衛(wèi)生控制水平和產(chǎn)品質(zhì)量，保障人們身體健康，是當(dāng)前食品和水質(zhì)檢測(cè)所急需解決的重要問題。

近年來，在抗干擾培養(yǎng)基研究方面，國(guó)外企業(yè)尚無成熟產(chǎn)品，僅有一種對(duì)苯甲酸鹽防腐劑有抗性的接合酵母菌檢測(cè)培養(yǎng)基的報(bào)道，但該培養(yǎng)基尚不能推廣至其他酵母的檢測(cè)，應(yīng)用范圍極小；國(guó)內(nèi)方面，僅有廣東環(huán)凱公司在進(jìn)行抗防腐劑、抗消毒劑培養(yǎng)基的研制，現(xiàn)已初步形成產(chǎn)品。因此抗含氯消毒劑培養(yǎng)基的研制，對(duì)于彌補(bǔ)常規(guī)培養(yǎng)基在含消毒劑樣品檢測(cè)中的檢出率過低，防止?jié)撛诓缓细癞a(chǎn)品流入市場(chǎng)，以及為后續(xù)其他類型抗干擾培養(yǎng)基的研制提供理論與實(shí)踐，具有深遠(yuǎn)意義。

發(fā)明內(nèi)容：

發(fā)明主要目的在于克服目前常規(guī)培養(yǎng)基對(duì)含氯消毒劑樣品中細(xì)菌檢出率較低問題，最大限度地降低樣品檢測(cè)時(shí)含氯消毒劑對(duì)微生物的影響，提高含氯消毒劑樣品中細(xì)菌的檢出率及準(zhǔn)確率。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種抗含氯消毒劑細(xì)菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基是在常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)基中加入硫代硫酸鈉，硫乙醇酸鈉，甘氨酸，吐溫-80。

具體組成如下：胰蛋白胨5-10g/L，葡萄糖1-4g/L，牛肉粉2-5g/L，氯化鈉1-5g/L，酵母粉2-5g/L，瓊脂14-20g/L，硫代硫酸鈉1-5g/L，硫乙醇酸鈉1-5g/L，甘氨酸1-5g/L，吐溫-801-10g/L，其余為蒸餾水,pH＝7.0±0.2

采用上述培養(yǎng)基對(duì)有含氯消毒劑殘留樣品進(jìn)行計(jì)數(shù)的具體操作方法(參照GB4789.2-2010)：

1、按組分要求配制培養(yǎng)基，121℃、15min進(jìn)行高壓蒸汽滅菌；

2、取25g或25mL有含氯消毒劑殘留樣品于225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水中，用適宜方法充分混勻，制成1：10的樣品勻液；

3、制備10倍系列稀釋樣品勻液；

4、根據(jù)樣品的污染情況，選擇2-3個(gè)適宜稀釋度的殘樣品勻液(液體樣品可包括原液)，吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿；同時(shí)，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個(gè)無菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照；

5、及時(shí)將15mL～20mL冷卻至46℃的抗含氯消毒劑細(xì)菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻；

6、待瓊脂凝固后，將平板翻轉(zhuǎn)，36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h。水產(chǎn)品30℃±1℃培養(yǎng)72h±3h；

7、菌落計(jì)數(shù)方法：

按GB4789.2-2010中7.1所述的菌落總數(shù)計(jì)算方法中進(jìn)行計(jì)數(shù)。

本發(fā)明所述培養(yǎng)基可消除的含氯消毒劑的種類及濃度：

有益效果：

1、本發(fā)明設(shè)計(jì)所提供的抗含氯消毒劑細(xì)菌計(jì)數(shù)培養(yǎng)基中的硫代硫酸鈉和硫乙醇酸鈉對(duì)無機(jī)和有機(jī)含氯消毒劑均有解抑作用，而其中的甘氨酸和吐溫-80則針對(duì)某些復(fù)方含氯消毒劑中的酚類和表面活性劑類有解抑作用，同時(shí)豐富的營(yíng)養(yǎng)可保證細(xì)菌的良好生長(zhǎng)。

2、本發(fā)明中的解抑劑本身或與消毒劑反應(yīng)的產(chǎn)物對(duì)樣品中的微生物無殺滅或抑制其生長(zhǎng)的作用，對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分無破壞作用、亦不影響其物理性狀，所以當(dāng)檢測(cè)含氯消毒劑的樣品時(shí)，抗含氯消毒劑培養(yǎng)基的計(jì)數(shù)結(jié)果明顯優(yōu)于常規(guī)培養(yǎng)基，細(xì)菌檢出率提高200％以上。當(dāng)檢測(cè)不含氯消毒劑的樣品時(shí)，抗含氯消毒劑培養(yǎng)基與常規(guī)培養(yǎng)基的計(jì)數(shù)結(jié)果無明顯差異。

3、本發(fā)明可消除含氯消毒劑的濃度高，二氧化氯達(dá)到45mg/L；次氯酸鈉達(dá)到840mg/L；二氯異氰尿酸鈉達(dá)到600mg/L；三氯異氰脲酸達(dá)到500mg/L；二氯海因達(dá)到600mg/L；氯胺T達(dá)到1600mg/L。

具體實(shí)施方式：