[發明專利]一種VEGF單克隆抗體及其應用

有效

• 申請號: 201510549875.1
• 申請日: 2015-08-31
• 公開（公告）號: CN105001331B
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 孫耀蘭;楊承剛
• 申請（專利權）人: 北京泱深生物信息技術有限公司
• 主分類號: C07K16/22
• 分類號: C07K16/22;C12N15/13;G01N33/68;G01N33/577;A61K39/395;A61P35/00
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本發明公開了一種VEGF單克隆抗體，所述抗體包括輕鏈和重鏈，其中輕鏈可變區氨基酸序列見SEQ ID NO.1，重鏈可變區氨基酸序列見SEQ ID NO.2，本發明通過酶聯免疫實驗證實了所述抗體能夠與VEGF特異性的結合。本發明所述的抗體能夠有效檢測VEGF，對其檢測的靈敏度達0.6ng/ml。本發明所述的抗體能夠用于制備檢測VEGF的試劑盒和治療相關疾病的藥物。

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，具體而言涉及一種VEGF的單克隆抗體，本發明還涉及所述抗體的制備方法與其在制備檢測VEGF試劑盒中的應用。

背景技術

單克隆抗體由單一B細胞克隆產生的高度均一、僅針對某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術來制備，雜交瘤(hybridoma)抗體技術是在細胞融合技術的基礎上，將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合為B細胞雜交瘤。應用于醫療中時，在識別抗原中的顯示微小變化有助于減小副作用。單克隆抗體具有三種獨特的作用機制，分別為靶向效應、阻斷效應和信號傳導效應。

單克隆抗體藥物發展經歷了四個階段，分別為：鼠源性單克隆抗體、嵌合性單克隆抗體、人源化單克隆抗體和全人源單克隆抗體。在第一個階段中，鼠源單克隆抗體是用小鼠制備的普通單克隆抗體藥物，一方面抗體不能有效的激活人體中補體和FC受體相關的效應系統，被人體免疫系統識別產生人抗鼠抗體(HAMA)，在人體循環系統中很快被清除掉，另一方面它毒副作用明顯，常引起人體的不良反應，大大制約了其在臨床實驗及相關應用領域的發展；第二代人鼠嵌合性單抗藥物對小鼠抗體表面氨基酸殘基進行人源化改造，使其人源化程度達到70％左右，仍有很大的毒副作用；而后出現的第三代人源化單抗的人源化程度達到95％左右，更加接近于人體自身的抗體，大大降低了毒副作用。全人源抗體是從人體免疫B細胞中直接分離，作為治療性抗體基本沒有排異反應，具有不可替代的優勢。

單克隆抗體除了用于制備治療藥物，由于其與物質結合時特異的，所以單克隆抗體還可用于制備檢測試劑。

人血管內皮生長因子(VEGF)是正常和異常血管新生的重要調節因子，在生理和病理性血管新生中起重要作用。其主要作用機制是作為一種促內皮細胞分裂素，促進血管內皮細胞分裂、增殖以及血管生成。VEGF參與了腫瘤發生和發展整個過程，腫瘤組織快速生長，導致營養供應不足，在缺氧狀態下，腫瘤細胞表達VEGF顯著增加，VEGF局部濃度的升高可以促進新生血管的形成，促進腫瘤的發生發展。

VEGF家族成員共包括五個:VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和PIGF，分別由各自的基因編碼。VEGF家族成員均與細胞膜酪氨酸受體相互作用，導致受體二聚化和自身磷酸化，并啟動信號級聯反應，激活大量下游蛋白，如磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)、Ras、有絲分裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)等，介導相應的生物學效應

VEGF-A通常被稱為VEGF，因為VEGF-A是血管發生和祖內皮細胞分化的關鍵調節劑，在人類多種腫瘤中，VEGF-A都是過表達的，這與腫瘤的增殖、侵襲和轉移呈正相關。

研究表明，食管癌患者血漿中VEGF與TGF-β1的表達水平明顯高于正常人的表達水平，提示血漿中VEGF與TGF-β1可能參與了食管癌的發生。VEGF與TGF-β1的表達水平可以作為食管癌早期檢測的指標。還有研究表明VEGF蛋白在前列腺癌組織中有顯著的高表達，且與臨床分期、骨轉移密切相關。

鑒于此，本領域需要一種準確檢測VEGF表達水平的試劑，用于各類與VEGF高表達的疾病的早期診斷。為解決上述問題本發明人通過雜交瘤技術篩選到了特異性強、靈敏度高的抗體。

發明內容