[發明專利]一種快速檢測全血紅細胞二十二烷四烯酸的方法

有效

• 申請號: 201510544981.0
• 申請日: 2015-08-31
• 公開（公告）號: CN105241969B
• 公開（公告）日: 2018-03-02
• 發明（設計）人: 燕啟江;梁耀銘;程雅婷;趙蓓蓓;郭周萍;趙強;劉菲菲
• 申請（專利權）人: 西安金域醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務所(普通合伙)11470
• 代理人: 劉曄

技術領域

本發明屬于生物檢測技術領域，涉及一種快速檢測全血紅細胞二十二烷四烯酸的方法。

背景技術

在人體內，少量脂肪酸以游離形式存在，大部分以結合形式，如甘油三酯、磷脂、糖脂等存在。從營養學角度，脂肪酸可分為必需脂肪酸和非必需脂肪酸，非必需脂肪酸是指機體可以自行合成，不必依靠食物供應的脂肪酸；必需脂肪酸是指人體維持機體正常代謝不可缺少而自身又不能合成或合成速度慢，無法滿足機體需要，必須通過食物供給的脂肪酸。必需脂肪酸可分為ω（Omega）-6系列脂肪酸和 ω（Omega）-3系列脂肪酸。膳食中必需脂肪酸缺乏將導致皮膚病變、神經和視覺疑難癥、心臟疾病等問題。

由于紅細胞膜上脂肪酸的組成能夠反映人群的長期飲食結構，而不會受到短期內飲食的影響。因此，測定人全血紅細胞脂肪酸，能夠準確、客觀的反映機體內不同脂肪酸的營養水平。

國內外有關脂肪酸檢測的相關報道盛多，涉及到食品、環境、醫藥衛生、臨床應用等多個領域，檢測方法包括氣相色譜法（GC）、氣相色譜-質譜法（GC-MS）和液相色譜-串聯質譜法（LC-MS/MS），檢測樣本類型更是涉及食物、水質、藥品、血液、組織等。但是，不同的應用領域及不同的樣品類型，所涉及的樣品處理與脂肪酸檢測分析流程千差萬別，因此不同領域以及不同樣品類型的脂肪酸檢測方法之間無可比性。

目前，全血紅細胞脂肪酸的檢測主要有GC、GC-MS和LC-MS/MS三種。GC是目前紅細胞脂肪酸檢測的常用方法，但是此方法的檢測器對未實現色譜分離的類似脂肪酸，無法實現準確定性分離和定量分析，因此無法對多種脂肪酸特異性、準確的定性和定量分析。LC-MS/MS方法前處理較為復雜，且分析結果重現性較差。而GC-MS方法由于同時具有氣相的分離功能和質譜的特異性定性、定量功能，所以可以解決GC和LC-MS/MS的弊端，但是現有的GC-MS方法分析時間較長，檢測通量較低。

中國專利201210247480.2公開了一種氣相色譜-質譜聯用檢測脂肪酸含量的方法，該方法針對的樣品為動物組織，樣品的前處理包括皂化步驟，還需要充氮氣保護，樣品的前處理復雜。

因此，本領域技術人員迫切需要一種前處理簡單、檢測快速、方法靈敏度高、特異性強的適用于全血紅細胞脂肪酸的檢測方法。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明提供一種快速檢測全血紅細胞二十二烷四烯酸的方法，該方法的樣品用量少，前處理簡單，靈敏度高，特異性強，定性、定量功能強大，并且整個檢測過程時間短、檢測通量高。本發明僅涉及全血樣本紅細胞二十二烷四烯酸的檢測。

一種快速檢測全血紅細胞二十二烷四烯酸的方法，包括如下步驟：

A）全血樣品的前處理：從全血樣品中分離紅細胞，加入內標溶液和鹽酸-甲醇溶液進行衍生化反應，然后加入萃取劑萃取，取上清液并氮氣吹干，殘渣中加入復溶劑，混勻，得到樣品檢測液；

B）對所述樣品檢測液采用氣相色譜-質譜儀進行檢測，氣相色譜條件包括：色譜柱采用極性色譜柱，載氣為氦氣，不分流進樣，線速度流量控制方式，載氣流量為0.80~1.00mL/min，起始柱溫60℃，先升溫至180℃，然后升溫至220℃，整個升溫程序的梯度時間為8~15min；質譜條件為：采用電子轟擊離子源，采用全掃描和選擇離子掃描方式。

采用上述技術方案，前處理簡單，通過萃取-吹干-復溶的過程，有效去除了干擾物質，使紅細胞中的二十二烷四烯酸轉化為揮發性較強、適用于氣相色譜質譜儀檢測的二十二烷四烯酸甲酯產物；檢測方法的靈敏度高，特異性強，定性、定量功能強大，準確性好，并且整個檢測過程時間短、檢測通量高。

優選地，所述內標溶液選自十七烷酸。除十七烷酸，外本發明還可以選用十五烷酸或十九烷酸作為內標溶液。

優選地，所述萃取劑選自正己烷，所述復溶劑選自正己烷。使用正己烷作為萃取劑，可以將各種脂肪酸的甲酯化產物萃取出來，萃取效率高且有效避免了其他物質的干擾。

優選地，所述內標溶液與紅細胞的體積比為1：(1~2)；所述紅細胞、鹽酸-甲醇溶液、萃取劑及復溶劑的體積比為1：(10~25)：(20~50)：(4~10)。

優選地，所述紅細胞、鹽酸-甲醇溶液、萃取劑及復溶劑的體積比為1：20：40：8。

優選地，所述極性色譜柱選自規格為20m*0.18mm*0.20μm的極性毛細管色譜柱。