[發(fā)明專利]柯薩奇病毒A16和腸道病毒71的IgM抗體聯(lián)合檢測(cè)裝置及制法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510543165.8
• 申請(qǐng)日: 2015-08-31
• 公開（公告）號(hào): CN105044362A
• 公開（公告）日: 2015-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙旻;楊小軍;李欣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林雙正醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 吉林長(zhǎng)春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司 22100
• 代理人: 王怡敏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)療檢測(cè)設(shè)備領(lǐng)域，特別涉及一種柯薩奇病毒A16和腸道病毒71的IgM抗體聯(lián)合檢測(cè)裝置及制法，可實(shí)現(xiàn)柯薩奇病毒A16型(CA16)和腸道病毒71型(EV71)IgM抗體的靈敏、特異、快速檢測(cè)。

背景技術(shù)

手足口病（HFMD）是一種以手足皮膚和口腔黏膜皰疹為主要癥狀的小兒急性傳染病。本病在國(guó)外1957年已有報(bào)道，1981年中國(guó)上海首次報(bào)告了手足口病疫情。近年來，EV71病毒的流行在亞太地區(qū)呈上升趨勢(shì)，引發(fā)HFMD的腸道病毒有20多種（型），其中柯薩奇病毒A16型（CA16）和腸道病毒71型（EV71）最為常見。通常情況下，CA16感染引起的HFMD在臨床癥狀等方面與EV71感染所引起的HFMD難以區(qū)別。不同的是CA16感染所致的患者可引發(fā)心肌炎、心包炎等并發(fā)癥，而EV71感染容易引起無菌性腦膜炎、腦干腦炎及由此引發(fā)急性弛緩性癱瘓、肺水腫和出血等嚴(yán)重并發(fā)癥，死亡率較高。由于患者為嬰幼兒，病情發(fā)展快，所以更需要早期、及時(shí)診斷疾病。疾病的早期和及時(shí)診斷，可以準(zhǔn)確鑒別兩種病毒，并對(duì)疾病的診療和預(yù)后判斷有重要的臨床意義，因此建立HFMD快速分型檢測(cè)方法尤為重要。

手足口病的臨床診斷主要依據(jù)三個(gè)方面：一是臨床表現(xiàn)，二是血清學(xué)證據(jù)，三是病原學(xué)證據(jù)，其中血清學(xué)檢測(cè)和病原學(xué)檢測(cè)是目前最主要的依據(jù)。病原學(xué)檢測(cè)方法中，病毒分離是最早用于CA16和EV71病毒的檢測(cè)診斷的方法，這種方法具有較高的特異性，但由于技術(shù)操作難度大、周期長(zhǎng)，不適合臨床使用。RT-PCR技術(shù)用于檢測(cè)病毒RNA，具有快速、簡(jiǎn)便的優(yōu)點(diǎn)，而且還有很高的靈敏度和特異性。但其靈敏度一方面依賴于患者攜帶的病毒與所用引物的匹配性，另一方面也受到擴(kuò)增片斷的高級(jí)結(jié)構(gòu)的很大影響。另外，RT-PCR本身對(duì)于操作環(huán)境及操作人員的要求較高，并且價(jià)格昂貴，因此難以在廣大基層單位中使用。目前市場(chǎng)上僅少數(shù)單位具備RT-PCR能力，且難以找到通用引物，目前所用引物具基因型特異性。HFMD血清學(xué)檢測(cè)可采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)CA16和EV71病毒IgM臨床意義較大，主要用于對(duì)早期感染的診斷，可作為臨床檢測(cè)和的初篩指標(biāo)。CA16和EV71病毒IgM抗體聯(lián)合檢測(cè)對(duì)初步鑒別診斷早期患者有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種柯薩奇病毒A16和腸道病毒71的IgM抗體聯(lián)合檢測(cè)裝置及制法，解決了現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題。本發(fā)明由固相有純化的高特異性柯薩奇病毒A16型(CA16)抗原、腸道病毒71型(EV71)抗原(檢測(cè)線T1、T2)和羊抗鼠IgG多克隆抗體(對(duì)照線)的硝酸纖維素膜、吸附有膠體金標(biāo)記鼠抗人IgM的玻璃纖維、樣品墊、吸水紙等其它輔料粘貼制成。可實(shí)現(xiàn)柯薩奇病毒A16型(CA16)和腸道病毒71型(EV71)IgM抗體的靈敏、特異、快速檢測(cè)，適應(yīng)于基層醫(yī)院對(duì)大量手足口病患者標(biāo)本的早期篩查。

本發(fā)明的上述目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

柯薩奇病毒A16和腸道病毒71的IgM抗體聯(lián)合檢測(cè)裝置，樣品墊1、免疫膠體金玻璃纖維膜2、硝酸纖維素膜3、吸收墊4分別粘貼在塑料板5上，所述硝酸纖維素膜3的兩端分別與吸收墊4、免疫膠體金玻璃纖維膜2搭接，所述免疫膠體金玻璃纖維膜2的另一端與樣品墊1搭接；所述硝酸纖維素膜3上設(shè)置第一檢測(cè)線T1、第二檢測(cè)線T2和質(zhì)控線C；所述的第一檢測(cè)線T1上固相有純化的高特異柯薩奇病毒A16型抗原；所述的第二檢測(cè)線T2上固相有純化的高特異性腸道病毒71型抗原；所述的質(zhì)控線C上噴點(diǎn)羊抗鼠IgM多克隆抗體。

所述的第一檢測(cè)線T1距離硝酸纖維素膜3的邊緣3~15mm。

所述的第二檢測(cè)線T2距離硝酸纖維素膜3的邊緣5~17mm。

所述的質(zhì)控線C距離硝酸纖維素膜3的邊緣10~18mm。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種柯薩奇病毒A16和腸道病毒71的IgM抗體聯(lián)合檢測(cè)裝置的制備方法，包括如下步驟：

（a）采用檸檬酸三鈉還原法制備膠體金；

（b）采用步驟（a）中制得的膠體金標(biāo)記鼠抗人IgM抗體獲得免疫膠體金；

（c）采用噴金緩沖液稀釋步驟（b）的免疫膠體金獲得免疫膠體金溶液，用免疫膠體金溶液噴涂于玻璃纖維墊，制得免疫膠體金玻璃纖維膜；

（d）在硝酸纖維膜的第一檢測(cè)線、第二檢測(cè)線上分別噴點(diǎn)柯薩奇病毒A16型抗原和腸道病毒71型抗原，在質(zhì)控線上噴點(diǎn)羊抗鼠IgM，制得免疫硝酸纖維素膜；