[發明專利]3D免疫細胞培養支架及其制備方法

有效

• 申請號: 201510541204.0
• 申請日: 2015-08-28
• 公開（公告）號: CN105087381A
• 公開（公告）日: 2015-11-25
• 發明（設計）人: 曾憲卓;魯菲
• 申請（專利權）人: 深圳愛生再生醫學科技有限公司
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C07K1/00;A61L31/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于免疫細胞培養技術領域，具體涉及一種3D免疫細胞培養支架及其制備方法。

背景技術

DC-CIK共免疫中，DC(dendriticcell，樹突狀細胞)主要是從骨髓組織、血液中分離出的具有很強的捕獲抗原、呈遞抗原的能力和分泌能力，能夠誘導持久有力的特異性抗腫瘤免疫反應；而CIK(細胞因子誘導的殺傷細胞)是人外周血中單個核細胞在體外經多種細胞因子刺激后獲得的一群異質細胞。它具有增殖能力強、殺瘤活性高和殺瘤譜廣、臨床應用不良反應小的特點，是腫瘤過繼免疫治療中更為有效的殺瘤效應細胞。DC-CIK聯合免疫中，將DC細胞和CIK細胞進行共培養，使兩者之間相互既促進DC的成熟，更能促進ClK的增殖并且加強CIK的腫瘤殺傷效力。

然而在上述DC與CIK的共培養中，由于DC本身分離自單個核細胞(PBMC)體外培養中的半貼壁細胞。目前進行共培養時，都是將DC直接貼附在培養容器上，培養容器的生長氛圍不如原始生存環境，導致DC的生長、成熟以及表達的性狀、免疫活性等方面都不能達到原始體內環境的水平，大大影響了DC所要具備的抗原提呈效果。而由于CIK功能的強弱與DC的細胞密度以及其提呈的專一性有關，DC體外增殖能力低、相反CIK競爭性增殖能力強大，會造成DC不足引起與CIK的接觸機會低，從而使得DC的抗原提呈作用無法發揮，從而降低CIK的治療效力。

因此，在上述培養環境不能滿足DC培養體外增殖的情形下，通常技術人員在培養中借用培養通常細胞的中空纖維培養、微載體培養以及微囊培養法等提升培養的環境，以彌補簡單液體培養瓶的不足；但是，DC這一類的單核貼壁細胞貼壁的容器壁面形狀迥異于人體內的微環境，在培養的過程中細胞體自身也容易受剪切力的損傷；更主要地，細胞的生長方向多趨于二維，導致采用上述培養方式DC細胞與抗原接觸機會仍然不足，細胞品質仍然無法達到較好的預期。

發明內容

本發明實施的目的在于克服上述體外培養中常規培養瓶培養環境的不足，提供一種3D免疫細胞培養支架及其制備方法。

為了實現上述發明目的，本發明實施例的技術方案如下：

一種3D免疫細胞培養支架的制備方法，包括如下步驟：

獲取膠原蛋白；

將所述膠原蛋白用0.03～0.06mol/L的醋酸溶解，制成質量分數1～2％的膠原溶液；

將所述膠原溶液冷凍成型，獲得膠原塊；

將所述膠原塊進行真空干燥，獲得膠原海綿體；

將所述膠原海綿體于100～110℃下進行真空熱交聯。

本發明的上述膠原支架的制備過程中，相比其他的普通的培養載體，其針對于DC細胞在體內的間質環境，采用膠原蛋白制成多孔隙的柔性支架，膠原蛋白的纖維粘性可以提升DC的吸附效果，從而使半貼壁類型的DC能具有全貼壁的能力；并且制備的支架具有的多孔隙的微孔環境，可以用來固定細胞的作用，以避免在大量CIK共培養中液體培養中懸浮和流動導致與CIK無法穩定接觸的不足；從而提升DC和CIK的接觸。

本發明進一步還提出一種根據上述方法直接制備得到的3D免疫細胞培養支架。該膠原蛋白纖維連接一體的支架整體，支架自身具有的多孔隙的微孔環境，并且自身具有良好的復水性和細胞親和性能，能保持或者吸收養料形成細胞培養的料床，提供相比其他支架更好的細胞培養環境；進行DC和CIK共培養的過程中，孔隙內細胞的保持能力在局部上可以提升DC和CIK的接觸幾率，提升DC和CIK培養的細胞活性和品質。

具體實施方式

為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

本發明實施例提出一種3D免疫細胞培養支架的制備方法，包括如下步驟：

S01，將膠原蛋白溶解在0.03～0.06mol/L的醋酸溶液中，制成質量分數1～2％的膠原溶液；

S02，將膠原溶液于模具中冷凍成型，得到膠原塊；

S03，將膠原塊進行真空干燥，得到膠原海綿體；

S04，將膠原海綿體于100～110℃下進行真空熱交聯，即得到膠原支架。