[發(fā)明專利]一種用于抑制高表達(dá)FAK基因的肝細(xì)胞癌細(xì)胞的siRNA及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510540569.1
• 申請日: 2013-03-15
• 公開（公告）號: CN105063051B
• 公開（公告）日: 2018-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃健
• 申請（專利權(quán)）人: 黃健
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;A61K31/7088;A61P35/00
• 代理公司: 上海浦一知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司31211
• 代理人: 王函

該申請是以下專利申請的分案申請：申請?zhí)枮?01310084396.8，申請日為2013年3月15日，發(fā)明名稱為“用于抗腫瘤的siRNA及其應(yīng)用”。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種siRNA及其應(yīng)用，特別是涉及一種用于抑制高表達(dá)FAK基因的肝細(xì)胞癌細(xì)胞的siRNA及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

粘附斑激酶(focal adhesion kinase，F(xiàn)AK)是一類胞質(zhì)非受體蛋白酪氨酸激酶，它在細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中處于十分重要的位置，介導(dǎo)多條信號通路，可以調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、并與胚胎發(fā)育、腫瘤發(fā)生與遷移有關(guān)。

腫瘤細(xì)胞的侵襲性生長是一個多步驟的復(fù)雜過程，有多種生物化學(xué)因子參與其中。腫瘤細(xì)胞必須黏附于細(xì)胞外基質(zhì)，通過促進(jìn)依賴于PTK激酶活性的細(xì)胞外基質(zhì)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)而影響細(xì)胞的黏附、運動與遷移。其中，F(xiàn)AK介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)是其中重要的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之一。

RNA干擾(RNAi)是指在進(jìn)化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(dsRNA)誘發(fā)的、同源mRNA高效特異性降解的現(xiàn)象。由于使用RNAi技術(shù)可以特異性剔除或關(guān)閉特定基因的表達(dá)，所以該技術(shù)已被廣泛用于探索基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤的基因治療領(lǐng)域。

因而，利用RNA干擾技術(shù)，并結(jié)合FAK的功能，為腫瘤的治療提供良好的指導(dǎo)意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種用于抑制高表達(dá)FAK基因的肝細(xì)胞癌細(xì)胞的siRNA及其應(yīng)用。通過利用RNA干擾技術(shù)，能有效抑制FAK基因的表達(dá)，因而，能更加有效地進(jìn)行腫瘤治療。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種用于抑制高表達(dá)FAK基因的SMMC7721、QGY7701肝細(xì)胞癌細(xì)胞的siRNA，所述siRNA為如SEQ ID NO.11-12所示的RNA序列。

另外，本發(fā)明還提供一種編碼如上所述的siRNA的DNA序列。

本發(fā)明還提供一種表達(dá)載體，所述表達(dá)載體包含有如上所述的siRNA的DNA序列。

本發(fā)明又提供一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞是一種可表達(dá)如上所述的siRNA序列的細(xì)胞，如可包含有如上所述的表達(dá)載體。

此外，本發(fā)明還提供一種如上所述的siRNA在制備抑制高表達(dá)FAK基因的SMMC7721、QGY7701肝細(xì)胞癌細(xì)胞的藥物中的應(yīng)用。

此外，本發(fā)明還提供一種抑制高表達(dá)FAK基因的SMMC7721、QGY7701肝細(xì)胞癌細(xì)胞的藥物，含有有效量的如上所述的siRNA和藥學(xué)上可接受的載體。

該藥物可以采用常規(guī)方法制備成相應(yīng)制劑，如可被制成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑的水溶液通過常規(guī)方法進(jìn)行制備。針劑、溶液等宜在無菌條件下制造。

該藥物可以方便的方式給藥，如通過局部、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、鼻內(nèi)等給藥途徑。

本發(fā)明藥物的用量和療程可根據(jù)劑型、患者的年齡、疾病的輕重程度作適當(dāng)調(diào)整，即具體施用劑量取決于多種因素，如給藥方式、用藥者健康狀況等因素，這些都是在熟練醫(yī)師技能范圍內(nèi)。

再者，本發(fā)明還提供一種藥盒，含有如上所述的siRNA或含有如上所述的藥物。該藥盒可根據(jù)制造、使用或銷售藥品或生物制品的政府管理機(jī)構(gòu)所給出的指示性提示，該提示反映出生產(chǎn)、使用或銷售的政府管理機(jī)構(gòu)許可其在人體上施用。

本發(fā)明實驗證明FAK基因在肝癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織，因此，F(xiàn)AK基因可作為診斷肝癌的特異標(biāo)志基因，使肝癌診斷更加準(zhǔn)確、快速。同時，本發(fā)明的siRNA能抑制人FAK基因表達(dá)，減少肝癌細(xì)胞侵襲，因此，本發(fā)明的siRNA可應(yīng)用于在制備抑制肝癌的藥物中，為治療或防治肝癌新藥的開發(fā)提供新的途徑。

附圖說明

下面結(jié)合附圖與具體實施方式對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明：

圖1是RT-PCR驗證FAK基因在10例肝癌病人癌組織和癌旁組織中的表達(dá)情況示意圖，其中，“N”指癌旁組織，“C”指肝癌組織；

圖2是熒光定量PCR檢測FAK基因在95例肝癌病人中的表達(dá)情況圖；

圖3是Panomics分析FAK基因在146例肝癌病人中的表達(dá)情況圖；

圖4是siRNA轉(zhuǎn)染SMMC7721細(xì)胞后的FAK表達(dá)圖；

圖5是siRNA轉(zhuǎn)染W(wǎng)RL68細(xì)胞后的FAK表達(dá)圖；

圖6是siRNA轉(zhuǎn)染QGY7701細(xì)胞后的FAK表達(dá)圖；