[發(fā)明專利]基于核酸適配體的雙酚A比色檢測法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510536616.5
• 申請日: 2015-08-27
• 公開（公告）號: CN105158182A
• 公開（公告）日: 2015-12-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王魯梅;張東偉;詹深山;徐涵楚;夏兵;呂晶
• 申請（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;C12N15/115
• 代理公司: 上海漢聲知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中;陳少凌

1.一種雙酚A比色法檢測用的核酸適配體，其特征在于，所示核酸適配體具體如SEQIDNo.1所示。

2.一種基于權(quán)利要求1所述核酸適配體的雙酚A比色檢測法，其特征在于，所述比色檢測法具體包括如下步驟：

標(biāo)準(zhǔn)液制備：向核酸適配體溶液中加入雙酚A溶液，得濃度已知的雙酚A濃度梯度溶液；向所述雙酚A濃度梯度溶液加入陽離子聚合物溶液、納米金溶液，即得比色檢測用標(biāo)準(zhǔn)液；

對照液制備：向核酸適配體溶液中加入水，即得比色檢測用對照液；

標(biāo)準(zhǔn)線繪制：對所述標(biāo)準(zhǔn)液、對照液的吸光度進(jìn)行檢測，基于所述檢測所得數(shù)據(jù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；

吸光度檢測：參照所述標(biāo)準(zhǔn)液制備的方法，將雙酚A溶液用待測樣品代替，制得樣品檢測液；以所述對照液為對照，對樣品檢測液的吸光度進(jìn)行檢測，將檢測所得數(shù)據(jù)帶入所述標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可對比計算得出待測樣品中的雙酚A濃度。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的核酸適配體的雙酚A比色檢測法，其特征在于，標(biāo)準(zhǔn)液制備的步驟中，所述核酸適配體溶液具體指核酸適配體的Na₂HPO₄-NaH₂PO₄緩沖液，pH＝8。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的核酸適配體的雙酚A比色檢測法，其特征在于，標(biāo)準(zhǔn)液制備的步驟中，所述加入雙酚A溶液后，還需混勻、20～30℃恒溫孵育30分鐘；所述加入陽離子聚合物溶液后，還需混勻、20～30℃恒溫孵育20分鐘；所述加入納米金溶液后，還需20～30℃恒溫孵育15分鐘。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的核酸適配體的雙酚A比色檢測法，其特征在于，所述恒溫孵育的溫度為25℃。

6.根據(jù)權(quán)利要求2或4所述的核酸適配體的雙酚A比色檢測法，其特征在于，所述陽離子聚合物溶液中的陽離子聚合物具體為聚二烯基丙二甲基氯化銨。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的核酸適配體的雙酚A比色檢測法，其特征在于，標(biāo)準(zhǔn)線繪制、吸光度檢測的步驟中，所述吸光度的測定是在650nm和520nm波長條件下進(jìn)行的。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的核酸適配體的雙酚A比色檢測法，其特征在于，標(biāo)準(zhǔn)線繪制的步驟中，所述基于所述檢測所得數(shù)據(jù)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線具體指：標(biāo)準(zhǔn)液于650nm、520nm測得的吸光度分別為A₆₅₀、A₅₂₀，吸光度比A_雙酚A＝A₆₅₀/A₅₂₀；對照液于650nm、520nm測得的吸光度分別為A_對照650、A_對照520，吸光度比A_對照＝A_對照650/A_對照520，以雙酚A的濃度為橫坐標(biāo)、A_雙酚A＝A₆₅₀/A₅₂₀為縱坐標(biāo)作圖；A_雙酚A與空白對照組A_對照之差ΔA進(jìn)行線性擬合，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。

9.根據(jù)權(quán)利要求2或8所述的核酸適配體的雙酚A比色檢測法，其特征在于，所述檢測所得數(shù)據(jù)具體指樣品檢測液與對照液的吸光度比差ΔA。

10.一種根據(jù)權(quán)利要求2所述核酸適配體的雙酚A比色檢測法用檢測體系，其特征在于，所述檢測體系包括標(biāo)準(zhǔn)液、對照液、樣品檢測液；

所述標(biāo)準(zhǔn)液的制備具體包括：向核酸適配體溶液中加入雙酚A溶液，得濃度已知的雙酚A濃度梯度溶液；向所述雙酚A濃度梯度溶液加入陽離子聚合物溶液、納米金溶液，即得標(biāo)準(zhǔn)液；

所述對照液的制備具體包括：向核酸適配體溶液中加入水，即得比色檢測用對照液；

所述樣品檢測液的制備具體包括：向核酸適配體溶液中加入陽離子聚合物溶液、納米金溶液，即得樣品檢測液；向所述樣品檢測液中加入檢測樣品、以所述對照液為對照，即可進(jìn)行樣品檢測。