[發(fā)明專利]鑒定番茄抗晚疫病性狀的方法及其所用分子標(biāo)記和引物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510536345.3
• 申請(qǐng)日: 2014-02-21
• 公開（公告）號(hào): CN105087802B
• 公開（公告）日: 2018-09-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李君明;鄭崢;劉磊;杜永臣;張春芝;李濤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢;任鳳華

本發(fā)明公開了鑒定番茄抗晚疫病性狀的方法及其所用分子標(biāo)記和引物。該方法包括以待鑒定番茄的基因組DNA為模板，用R2M1S進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到R2M1S的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；檢測(cè)所述R2M1S的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的序列，按照下述方法確定所述待鑒定番茄的抗晚疫病性狀：如果所述待鑒定番茄的所述R2M1S的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物含有SEQ ID No.3的DNA片段，所述待鑒定番茄為抗晚疫病番茄；如果所述待鑒定番茄的所述R2M1S的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物不含有SEQ ID No.3的DNA片段，所述待鑒定番茄為非抗晚疫病番茄；所述R2M1S由SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示的單鏈DNA組成。

本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?01410059173.0、申請(qǐng)日為2014年02月21日、發(fā)明創(chuàng)造名稱為“鑒定或輔助鑒定番茄抗晚疫病性狀的方法及其專用分子標(biāo)記和引物”的分案申請(qǐng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及鑒定番茄抗晚疫病性狀的方法及其所用分子標(biāo)記和引物。

背景技術(shù)

番茄屬于茄科植物，一年生或多年生。番茄染色體數(shù)2n＝24，基因組約為950Mb。番茄由于具有風(fēng)味獨(dú)特、食用多樣、適應(yīng)性廣、容易栽培等特點(diǎn)，早已成為世界上重要的蔬菜作物。據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織統(tǒng)計(jì)，2010年世界番茄總產(chǎn)量達(dá)1.45億噸。隨著生產(chǎn)上長(zhǎng)時(shí)間連續(xù)栽培，以及全球范圍的氣候的變化，番茄生產(chǎn)面臨越來嚴(yán)重的生物和非生物逆境的挑戰(zhàn)，同時(shí)消費(fèi)者對(duì)產(chǎn)品品質(zhì)以及產(chǎn)品的多樣性的要求也越來越高。利用不斷發(fā)展的育種理論和技術(shù)，培育滿足生產(chǎn)和市場(chǎng)需求的優(yōu)良品種，是番茄育種的根本目的。從上世紀(jì)80年代后期開始，分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)和基因工程技術(shù)為核心的生物育種技術(shù)得到了快速的發(fā)展。同時(shí)作為重要的模式植物，番茄在分子遺傳學(xué)、分子生理學(xué)、基因組學(xué)以及生物進(jìn)化領(lǐng)域等得到了廣泛而深入的研究。這一切共同推動(dòng)番茄育種比其他任何蔬菜作物都更早地進(jìn)入到了分子操作的新階段。隨著遺傳學(xué)的發(fā)展，遺傳標(biāo)記的應(yīng)用得到廣泛推廣，分為形態(tài)標(biāo)記、細(xì)胞學(xué)標(biāo)記、生化標(biāo)記等表現(xiàn)型標(biāo)記和DNA片段標(biāo)記等基因型標(biāo)記。DNA片段標(biāo)記能夠直接反映生物個(gè)體或種群間基因組的某種差異，具有不受環(huán)境和基因表達(dá)的影響，而且具有數(shù)量豐富，遺傳穩(wěn)定，操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。常用的分子標(biāo)記有基于Southern雜交的限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性標(biāo)記(RFLP)，基于PCR技術(shù)的DNA擴(kuò)增方法的隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA標(biāo)記(RAPD)，特定序列擴(kuò)增標(biāo)記(SCAR)和簡(jiǎn)單重復(fù)序列標(biāo)記(SSR)，以及基于PCR與酶切相結(jié)合的擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性標(biāo)記(AFLP)、切割擴(kuò)增的多態(tài)性序列標(biāo)記(CAPS)和單核苷酸多態(tài)性(SNP)等。

晚疫病由致病疫霉(Phytophthora infestans)引起，是最具毀滅性的番茄田間病害之一。在有利病原菌生長(zhǎng)的條件下，晚疫病可以以驚人的速度蔓延，7至10天便可殺死宿主。由于近幾年番茄晚疫病的不斷流行，挖掘抗番茄晚疫病的分子標(biāo)記也顯得越來越重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供鑒定或輔助鑒定番茄抗晚疫病性狀的方法及其專用分子標(biāo)記和引物。

本發(fā)明提供了四種鑒定或輔助鑒定番茄抗晚疫病性狀的方法。

本發(fā)明所提供的第一種鑒定或輔助鑒定番茄抗晚疫病性狀的方法，包括如下步驟：以待鑒定番茄的基因組DNA為模板，用R2M1S進(jìn)行PCR擴(kuò)增得到R2M1S的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；檢測(cè)所述R2M1S的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的序列，按照下述方法確定所述待鑒定番茄的抗晚疫病性狀：

如果所述待鑒定番茄的所述R2M1S的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物含有SEQ ID No.3的DNA片段，所述待鑒定番茄為抗晚疫病番茄或?yàn)楹蜻x抗晚疫病番茄；

如果所述待鑒定番茄的所述R2M1S的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物不含有SEQ ID No.3的DNA片段，所述待鑒定番茄為非抗晚疫病番茄或?yàn)楹蜻x非抗晚疫病番茄；

所述R2M1S由SEQ ID No.1所示的單鏈DNA和SEQ ID No.2所示的單鏈DNA組成。