[發明專利]生物粘合劑及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201510534230.0
• 申請日: 2015-08-27
• 公開（公告）號: CN105031717B
• 公開（公告）日: 2017-09-05
• 發明（設計）人: 胡碧茹;曾玲;吳文健;劉志明;李韻秋
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍國防科學技術大學
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;A61L24/10;C09J189/00;C07K19/00;C12N15/70;C07K1/22
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所(普通合伙)43008
• 代理人: 趙洪,黃藝平

1.一種生物粘合劑的制備方法，其特征在于，所述生物粘合劑為包括Trx-Balcp19k蛋白，所述Trx-Balcp19k蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述制備方法包括以下步驟：

S1、從白脊藤壺軟組織提取總RNA，反轉錄成第一鏈cDNA；

S2、以步驟S1中第一鏈cDNA為模板，根據GenBank數據庫中白脊藤壺Balcp19k基因序列設計引物進行PCR擴增得到擴增產物；

S3、將所述步驟S2中得到的擴增產物連接到原核表達載體pET-32a(+)中構建重組質粒；

S4、將所述步驟S3中構建的重組質粒轉化到大腸桿菌BL21(DE3)菌株中得到轉化子；

S5、將所述步驟S4中的轉化子進行IPTG誘導表達得到表達產物；

S6、將所述表達產物進行鎳親和層析純化得到Trx-Balcp19k洗脫液；

S7、將所述Trx-Balcp19k洗脫液進行透析過夜，得到Trx-Balcp19k蛋白，所述透析過程中采用的透析液為去離子水。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法還包括以下步驟：將Trx-Balcp19k蛋白溶于溶劑中得到生物粘合劑。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟S2中設計的引物為：SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列、SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。

4.根據權利要求1至3中任一項所述的制備方法，其特征在于，所述步驟S6中所述親和層析具體包括以下步驟：

S6-1、將表達產物置于層析柱上用咪唑濃度為50mM～80mM的咪唑緩沖液漂洗層析柱，以去除非特異結合的雜蛋白；

S6-2、用咪唑濃度為250mM～300mM的咪唑緩沖液洗脫層析柱，獲得Trx-Balcp19k洗脫液。

5.一種權利要求1至4中任一項所述制備方法制備得到的生物粘合劑。

6.根據權利要求5所述的生物粘合劑，其特征在于，包括Trx-Balcp19k蛋白和溶劑，所述Trx-Balcp19k蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述溶劑為水或體積濃度為5%～10%的醋酸。

7.一種權利要求5～6中任一項所述的生物粘合劑在生理材料之間粘結中的應用。

8.一種權利要求5～6中任一項所述的生物粘合劑在非生理材料之間粘結中的應用。

9.一種權利要求5～6中任一項所述的生物粘合劑在非生理材料與生理材料之間粘結中的應用。