[發明專利]基于CDC27基因用于結直腸癌輔助診斷和/或預后判斷的試劑盒

在審

• 申請號: 201510532136.1
• 申請日: 2015-08-25
• 公開（公告）號: CN105112524A
• 公開（公告）日: 2015-12-02
• 發明（設計）人: 黃文林;邱琳;吳江雪;劉然義
• 申請（專利權）人: 黃文林
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 郭煒綿;陳燕嫻

技術領域

本發明屬于生物醫學分子診斷領域，具體涉及基于與結直腸癌轉移及預后相關的基因CDC27而開發得到的一種用于結直腸癌輔助診斷和/或預后判斷的試劑盒。

背景技術

大腸癌(colorectalcancer，CRC)是人類主要惡性腫瘤之一，其發病率和死亡率分別位于第三位和第四位。每年有120萬新確診的病例，并且有超過60萬名患者死于結直腸癌。

近年來由于生活水平的提高和膳食結構的改變，結直腸癌正逐漸成為我國常見的惡性腫瘤，尤其是在我國大中城市，結直腸癌的發病率上升趨勢更加明顯，已成為我國腫瘤患者死亡的重要原因。隨著外科手術治療的進步及新興化療藥物的問世，結直腸癌病人的近期療效得到了顯著提高，但其5年總存活率始終在50-60％。

大量研究表明，傳統的遺傳學改變和表觀遺傳學改變共同促進了結直腸癌的發生、發展。闡明大腸癌的發生、發展及轉移的重要驅動分子事件，將有助于其早期診斷、預后預測及開發新的治療手段。

CDC27是泛素化連接酶(anaphase-promotingcomplex,APC)的核心組成部分。已有研究表明，CDC27在結直腸癌中具有較高的突變率。另外，在前列腺癌、骨肉瘤、腎上腺皮質腫瘤以及生殖細胞腫瘤的測序研究中，CDC27也同樣被發現存在著較高的突變率。

發明內容

本發明的目的在于提供一種用于結直腸癌輔助診斷和/或預后判斷的試劑盒，該試劑盒可以特異性檢測CDC27基因的表達有無上調，從而作為結直腸癌診斷和預后判斷的依據。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一種用于結直腸癌輔助診斷和/或預后判斷的試劑盒，包括試劑A和/或試劑B：

試劑A是用于檢測CDC27基因表達水平的引物對，也即用于在實時定量PCR檢測CDC27mRNA表達水平的引物對，所述引物對為以下任意一對：

引物1：其序列如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示；

引物2：其序列如SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示；

引物3：其序列如SEQIDNO:7和SEQIDNO:8所示；

引物4：其序列如SEQIDNO:9和SEQIDNO:10所示；

引物5：其序列如SEQIDNO:11和SEQIDNO:12所示；

引物6：其序列如SEQIDNO:13和SEQIDNO:14所示；

引物7：其序列如SEQIDNO:15和SEQIDNO:16所示；

引物8：其序列如SEQIDNO:17和SEQIDNO:18所示；

引物9：其序列如SEQIDNO:19和SEQIDNO:20所示；

引物10：其序列如SEQIDNO:21和SEQIDNO:22所示；

試劑B是用于檢測CDC27蛋白含量的試劑，優選抗CDC27蛋白的抗體。

實驗證明，在結直腸癌組織和細胞中，CDC27mRNA和蛋白水平顯著高于正常組織，因此通過對CDC27mRNA和蛋白表達水平的檢測就可以診斷結直腸癌有無發生。此外，預后分析證明CDC27高表達者預后較差。本發明據此針對CDC27設計了特異性的引物和試劑，用作結直腸癌輔助診斷和/或預后判斷的試劑盒。

本發明相對于現有技術具有如下的優點及效果：

本發明首次報導了CDC27在結直腸癌組織和細胞株中高表達，并證明其促進結直腸癌細胞的遷移，為結直腸癌轉移的輔助診斷提供了新的有力工具，具有重要的意義和極大的應用價值。

附圖說明

圖1是CDC27在21對結直腸癌病人組織中mRNA相對表達水平比較。

圖2是western檢測CDC27在結直腸癌細胞株中蛋白表達水平。

圖3是免疫組織化學染色檢測CDC27在結直腸癌癌旁及腫瘤組織中蛋白染色強度。

圖4是CDC27蛋白在結直腸癌病人癌旁和腫瘤組織中相對表達量的比較。

圖5是Kaplan-Meier生存分析證實在晚期結直腸癌病人中CDC27高表達者預后較差。

圖6是THC8307細胞過表達CDC27基因后細胞的遷移圖。

圖7是DLD1細胞干擾CDC27基因的表達后細胞的遷移圖。

具體實施方式

下面結合實施例及附圖對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限于此。