[發明專利]一種利用細胞分泌蛋白SERS光譜檢測藥物細胞毒性方法

有效

• 申請號: 201510529521.0
• 申請日: 2015-08-26
• 公開（公告）號: CN105181670B
• 公開（公告）日: 2017-10-10
• 發明（設計）人: 林居強;楊洪欽;阮秋詠;王瑜華;徐朝賢;陳榮;謝樹森
• 申請（專利權）人: 福建師范大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種利用細胞分泌蛋白SERS光譜檢測藥物細胞毒性方法，其特征在于：具體包括以下步驟：

1）細胞分泌蛋白的富集

待體外培養細胞處于對數分裂期時，棄掉原有細胞培養液，用PBS緩沖液沖洗三次，加入含有抗癌藥物但不含雙抗和胎牛血清的不完全細胞培養液，培養1-72h，分別取不同培養時間的細胞培養液200~500μL與-20℃~0℃的400-1000μL無水乙醇混合于一離心管中，8000~12000 rpm離心5-10min，棄上清液；沉淀用95wt%的乙醇洗滌一次，10000rpm離心2-5 min，棄上清液，得到沉淀于離心管底部的細胞分泌蛋白，室溫下干燥30-60min；然后加入10~20μL超純水溶解干燥后的細胞分泌蛋白，得到細胞分泌蛋白液；

2）SERS光譜檢測

將SERS光譜增強基底溶膠進行離心濃縮處理，取SERS光譜增強基底濃縮膠體10-40μL與步驟1）制得的細胞分泌蛋白液2-10 μL混合均勻后，在光滑平整的檢測基底上點樣，點樣直徑為5-8 mm，自然晾干后進行SERS光譜的測量；

3）細胞分泌蛋白SERS光譜預處理及特征峰選擇

對步驟2）測量得到的細胞分泌蛋白SERS光譜進行強度歸一化或面積歸一化處理，從350-3500cm^-1波數范圍選取1-3個變化最為顯著譜峰作為細胞分泌蛋白SERS光譜特征峰；

4）建立SERS光譜特征峰-細胞存活率標準曲線

利用四唑鹽比色法檢測對應濃度抗癌藥物作用下的細胞存活率變化，以步驟3）SERS光譜特征峰的相對強度為縱坐標，四唑鹽比色法測得的細胞存活率為橫坐標作圖即得標準曲線；最后根據SERS光譜特征峰相對強度在標準曲線上直接查出相應濃度抗癌藥物作用細胞后細胞的存活率變化。

2.根據權利要求1所述的利用細胞分泌蛋白SERS光譜檢測藥物細胞毒性的方法，其特征在于：步驟2）所述SERS光譜增強基底溶膠為銀溶膠或金溶膠中的一種。

3.根據權利要求1所述的利用細胞分泌蛋白SERS光譜檢測藥物細胞毒性的方法，其特征在于：步驟2）所述的離心濃縮處理為：離心轉速為8000-12000rpm，時間為8-15 min。

4.根據權利要求1所述的利用細胞分泌蛋白SERS光譜檢測藥物細胞毒性的方法，其特征在于：步驟2）所述的檢測基底為99.99%鋁片、石英基底、不銹鋼基底、金箔、MgF₂、CaF₂、銀箔中的一種。

5.根據權利要求1所述的利用細胞分泌蛋白SERS光譜檢測藥物細胞毒性的方法，其特征在于：步驟2）所述的SERS光譜的測量其條件為：激光功率為0.15 ~18 mW，激光激發波長為400~900 nm，取譜范圍為350-3500 cm^-1。

6.根據權利要求1所述的利用細胞分泌蛋白SERS光譜檢測藥物細胞毒性的方法，其特征在于：步驟3）所述的細胞分泌蛋白SERS光譜特征峰為藥物作用細胞前后同一細胞分泌蛋白SERS光譜峰的相對強度出現明顯變化的SERS光譜峰。