[發明專利]2-酮-L-古龍酸的發酵生產方法在審
| 申請號: | 201510523931.4 | 申請日: | 2015-10-22 |
| 公開(公告)號: | CN105112488A | 公開(公告)日: | 2015-12-02 |
| 發明(設計)人: | 元英進;董秀濤;丁明珠;王恩旭;馬倩 | 申請(專利權)人: | 天津大學 |
| 主分類號: | C12P39/00 | 分類號: | C12P39/00;C12P7/50;C12R1/11 |
| 代理公司: | 北京集佳知識產權代理有限公司 11227 | 代理人: | 趙青朵 |
| 地址: | 300072 天津市*** | 國省代碼: | 天津;12 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 古龍酸 發酵 生產 方法 | ||
1.一種2-酮-L-古龍酸的發酵生產方法,其特征在于,以山梨醇為原料,將氧化葡萄糖酸桿菌、生酮古龍酸桿菌及其伴生菌混合發酵培養,制得2-酮-L-古龍酸。
2.根據權利要求1所述的發酵生產方法,其特征在于,所述伴生菌為芽孢桿菌。
3.根據權利要求1或2所述的發酵生產方法,其特征在于,所述伴生菌為巨大芽孢桿菌。
4.根據權利要求1至3任一項所述的發酵生產方法,其特征在于,包括種子培養和發酵培養。
5.根據權利要求4所述的發酵生產方法,其特征在于,所述種子培養的培養基包括第一種子培養基和第二種子培養基;
所述第一種子培養基包括:玉米漿3g/L,酵母粉3g/L,蛋白胨10g/L,尿素1g/L,磷酸二氫鉀1g/L,硫酸鎂0.2g/L,碳酸鈣1g/L,山梨醇20g/L,pH調至6.7-7.2,121℃,滅菌20min,制成第一種子培養基;固體培養基另加20g/L的瓊脂粉;
所述第二種子培養基包括:玉米漿3g/L,酵母粉3g/L,蛋白胨10g/L,尿素1g/L,磷酸二氫鉀1g/L,硫酸鎂0.2g/L,碳酸鈣1g/L,山梨糖20g/L,pH調至6.7-7.2,121℃,滅菌20min,制成第二種子培養基;固體培養基另加20g/L的瓊脂粉。
6.根據權利要求5所述的發酵生產方法,其特征在于,所述種子培養包括如下步驟:
步驟1:將活化好的氧化葡萄糖酸桿菌接種于所述第一種子培養基中,經第一培養后,轉接所述第一種子培養基,擴大培養,制成第一種子液;
步驟2:將活化好的生酮古龍酸桿菌及其伴生菌接種于所述第一種子培養基中,經第二培養后,轉接所述第二種子培養基,擴大培養,制成第二種子液。
7.根據權利要求6所述的發酵生產方法,其特征在于,步驟1中所述第一培養為于30℃,200r/min培養24小時;
步驟1中所述擴大培養為于30℃,200r/min培養24小時;
步驟2中所述第二培養為于30℃,200r/min培養20小時;
步驟2中所述擴大培養為于30℃,200r/min培養12小時。
8.根據權利要求6或7所述的發酵生產方法,其特征在于,所述發酵培養為將所述第一種子液和第二種子液接種到發酵培養基中,發酵培養,制得2-酮-L-古龍酸。
9.根據權利要求8所述的發酵生產方法,其特征在于,所述發酵培養基包括玉米漿10g/L,尿素12g/L,磷酸二氫鉀1g/L,硫酸鎂0.2g/L,碳酸鈣1g/L,山梨醇80g/L,加消泡劑1ml,pH調至6.7-7.0,121℃,滅菌20min,制成發酵培養基。
10.根據權利要求6至9任一項所述的發酵生產方法,其特征在于,所述第一種子液中活菌數為3.60×1010~3.6×1011;以所述發酵培養基的質量為基準,所述第一種子液的接種量為10%;
所述第二種子液中活菌數為6.20×1010~6.2×1011;以所述發酵培養基的質量為基準,所述第二種子液的接種量為5%;
所述發酵培養為于30℃,500r/min,pH控制7.0,用2.5mol硫酸和5mol氫氧化鈉調節pH,通氣1.5vvm。
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