[發明專利]一種熒光定量的測量方法

有效

• 申請號: 201510520824.6
• 申請日: 2015-08-24
• 公開（公告）號: CN105158222B
• 公開（公告）日: 2018-06-05
• 發明（設計）人: 戴斌;李宗祥
• 申請（專利權）人: 三諾生物傳感股份有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 趙青朵

本發明屬于化學測量技術領域，公開了一種熒光定量的測量方法，本發明所述熒光定量的測量方法在同樣的條件下，分別測量反應液所產生的熒光強度F₀和待測樣品液與反應液混合后所產生的熒光強度F；由反應液所產生的熒光強度F₀和待測樣品液所產生的熒光強度F計算出待測樣品液真實濃度c，其中F/F₀＝Kc，K為熒光系數。本發明所述熒光定量的測量方法中所述反應液所產生的熒光強度F₀的測量和待測樣品液與反應液混合后所產生的熒光強度F的測量均在同樣的環境中進行，可以減少光源衰減與環境溫度的影響，同時無需設立空白樣或對照樣。而且本發明所述測量方法操作簡單，樣本不需要進行任何處理，對儀器的要求低，簡易的熒光儀即可完成測量。

技術領域

本發明屬于化學測量技術領域，具體涉及一種熒光定量的測量方法，尤其是涉及一種降低光源衰減與環境溫度的影響的熒光定量的測量方法。

背景技術

POCT，即時檢驗(point-of-care testing)，指在病人旁邊進行的臨床檢測，通常不一定是臨床檢驗師來進行，是在采樣現場即刻進行分析，省去標本在實驗室檢驗時的復雜處理程序，快速得到檢驗結果的一類新方法。盡管POCT的提法在90年代才開始出現，實際上在70年代，隨著重癥監護醫學的發展，對于POCT的需求就出現了。止凝血檢驗中，臨床醫生對快速報告與結果可靠的要求非常迫切，急診或者圍手術期出血時，實驗室的平均周轉時間(TAT)大約在45-90min，一般標準化實驗室的時間大約比POCT長1.5h。POCT和實驗室檢測凝血機能時，標本處理和準備方式是有明顯差別的。POCT操作簡便而且能夠快速檢出結果，因此，這種需求為POCT在止凝血檢驗中的應用打開了大門。POCT測定不需要血樣送檢，無需等待報告，可以很快給患者調整用藥劑量。POCT節省的時間可以產生一些無形價值，特別是在監護室和手術室中，手術時間的長短，處置的多少，時間往往意味著節約就醫成本，而且在止血血栓檢驗中還能減少不必要的輸血，優勢明顯

熒光定量測試是POCT中最常用的一種測量方法。其中一種熒光定量測量方法是直接以絕對熒光強度進行換算，其理論依據為熒光強度I正比于吸收的光量I_α和熒光量子效率

由朗-比耳定量：I_α＝I₀(1-10^-εbc)

濃度很低時(εbc≤0.05)，將括號近似處理后：

K為熒光系數(與物質性質、激發波長、發射波長、溶劑、溫度有關)，ε為待測樣品的摩爾吸光系數，b為液槽厚度。

從上述公式中可知，熒光強度與物質濃度呈正比關系，但前提是除了濃度低外，也需要保證I₀(激發光強度)是固定的，即每次的激發光的強度是一致的。但是，實際的檢測儀，尤其是POCT類的產品，很難保證光源不發生衰減，當光源衰減時，測試就會出現明顯偏差。因此，在實際的產品應用中，直接以絕對熒光強度與濃度建立的標準曲線，測試結果不可靠。

因此，在利用熒光定量測試時，為了提高結果的準確性，會使用到另外一種標準曲線的建立方法，以先測試空白溶液的熒光值，以絕對熒光值扣除空白值(差值)，以差值與濃度建立標準方程，但是該方法雖然一定程度上，減少了光源衰減的影響，但是需要每次測試時，測試空白樣本的熒光值，明顯增加成本和使用者的工作量，這在實際的POCT產品中并不易實現。

另一種熒光定量測量的方法稱為比較法，取已知量的熒光物質配成一標準溶液，測定其熒光強度。然后在同樣條件下測定試樣溶液的熒光強度，由標準溶液的濃度和兩個溶液的熒光強度的比值求得試樣中熒光物質的含量。由于標準樣本與試樣均在同樣條件下進行測試，所以光源衰減與環境溫度的影響可以減少，但是，每次測試時，均需要進行標準溶液的測定，因此同樣在POCT產品中不易實現。