[發明專利]臍帶間充質干細胞無血清保存液及其應用

有效

• 申請號: 201510518785.6
• 申請日: 2015-08-21
• 公開（公告）號: CN105076114A
• 公開（公告）日: 2015-11-25
• 發明（設計）人: 曾憲卓;魯菲
• 申請（專利權）人: 深圳愛生再生醫學科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于細胞保存液技術領域，具體涉及一種臍帶間充質干細胞無血清保存液及其應用。

背景技術

UC-MSCs(臍帶間充質干細胞)已廣泛應用于細胞移植替代治療，而移植和替代治療中細胞的活性與細胞質量是治療成功的關鍵。臍帶間充質干細胞培養之后，直至抑制手術和操作之前，都是采用臨床常用細胞保存液對UC-MSCs進行短期保存。其中，在細胞的保存過程中，為了保證細胞能持續維持細胞代謝以及避免其他各方面傷害等等，在保存液中都添加有血清作為細胞保護成分。

而經過反復的研究和跟蹤，由于血清中存在許多未知的成分，包括生長抑制因子、毒性因子，以及其他的大分子蛋白等等；雖然這些成分之間相互中和，最終細胞的性狀保存后變化較低，但是中間生長抑制因子和毒性因子等多種物質作用于細胞使細胞所產生的應激反應，并不能當成是沒發生過，而這些中間過程可能包含有氧化應激水平的增高、能量代謝會失衡、ATP水平快速下降等等，這些都會引起細胞活性與質量的明顯下降，最終導致在移植和替代治療之后不與損傷組織融合并且一段時間之后死亡，影響了治療效果。

發明內容

本發明實施的目的在于克服現有的缺陷，提供一種對移植備用的細胞起到保護作用，可以長效保持移植細胞的活性與質量，提髙移植細胞治療的臨床效果的臍帶間充質干細胞無血清保存液。

為了實現上述發明目的，本發明實施例的技術方案如下：

一種臍帶間充質干細胞無血清保存液，包括NaCl質量分數為0.85～0.92％的生理鹽水，所述生理鹽水中還添加有胰島素、雌激素和孕激素、氫化可的松、亞硒酸鈉、腺苷、N-乙酰半胱氨酸和L-谷氨酰胺。

在上述保存液的基礎上，本發明還提出將上述保存液用于細胞移植替代治療中對臍帶間充質干細胞進行保存的應用。

相比現有技術的血清保存液，本發明的保存液，盡量減低能夠產生多種成分的毒素傷害的物質來源。采用比較成分較少的功能成分，維系細胞的基本代謝，使其性能比較平緩，無巨大的變動；這些成分基本又能提供作為一些基本的活性營養物質和能量物質，以維持較低的代謝水平，使細胞活性處于較穩定的狀態，避免了生長和培養導致的形狀變異或者分化等情形，對細胞起到保護作用，可以長效保持移植細胞的活性與質量，提髙移植細胞治療的臨床效果。

具體實施方式

為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

本發明實例提出一種臍帶間充質干細胞無血清保存液，采用注射用生理鹽水作為基礎(NaCl的質量分數為0.85～0.92％)，在其中添加胰島素、雌激素和孕激素、氫化可的松、亞硒酸鈉、腺苷、N-乙酰半胱氨酸、以及L-谷氨酰胺。

L-谷氨酰胺(L-glutamine)在氨基酸組分中的有重要作用，谷氨酰胺可以合成核酸和蛋白質，是細胞生長必需成分，而谷氨酷胺缺乏會使細胞生長不良甚至導致細胞死亡。所以本發明在保存液中添加一定濃度的L-谷氨酰胺，在保存中滿足細胞基本代謝所需的谷氨酷胺，維持代謝活動處于相對較低的水平，避免脅迫式的進行大量代謝，反而會大大縮短組織細胞的壽命和活性。同時，本發明中添加L-谷氨酰胺的目的還在于，其在機體內能參與消化道黏膜黏蛋白構成成分氨基葡萄糖的生物合成，從而促進黏膜上皮組織的修復；跟蹤用于體外之后其可以有助于細胞膜結構的補充和修復功能，避免細胞的裂解死亡；所以在本發明保存液中使用還能借助其進行細胞的修復功能。

而本發明上述亞硒酸鈉和N-乙酰半胱氨酸消除保存能引起細胞活性降低或者死亡的細胞毒素。其中，亞硒酸鈉含有的微量元素硒參與谷胱甘肽過氧化物酶和過氧化物歧化酶的作用過程，可以促進氫過氧化物代謝，消除氧化物酶和氧自由基對細胞的傷害，這一點上對干細胞具有良好的損傷保護作用。相比血清中通過較多天然成分自身相互中和細胞毒素保護細胞的不同，上述保存液是盡量減低能夠產生多種成分的毒素傷害的物質來源，并且同時消除過氧化氫的傷害，因為是細胞生長和克隆的主要毒性物質，可由培養基中的酪氨酸、色氨酸、核黃素、抗壞血酸鹽等產生，引起細胞膜上的飽和脂肪酸、細胞蛋白質氧化和DNA損傷而導致細胞死亡。而N-乙酰半胱氨酸是活性氧自由基的清除劑，它可以改善氧化應激引起的不同種類細胞的損傷；對亞硒酸鈉的所減緩之外的其他的氧化損傷等進行彌補，保證細胞溫和的保存環境。