[發(fā)明專利]用于馬來沉香鑒定的基因檢測(cè)引物、探針和方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510518231.6
• 申請(qǐng)日: 2015-08-21
• 公開（公告）號(hào): CN105112410B
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張明哲;林曉佳;徐莉莉;陳吳健;吳志毅;尹文秀
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12Q1/6895
• 代理公司: 杭州千克知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

本發(fā)明公開了一種馬來沉香鑒定的基因檢測(cè)引物、探針和方法，所述方法包括具有馬來沉香的專屬特異性引物、探針和PCR檢測(cè)方法。利用本發(fā)明鑒定方法采樣量少，并且能快速、準(zhǔn)確、客觀地得到馬來沉香的種屬鑒定結(jié)果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及木材材種鑒定的基因檢測(cè)領(lǐng)域，具體地說涉及對(duì)馬來沉香的基因鑒定方法及其所使用的引物和探針。

背景技術(shù)

馬來沉香是瑞香科沉香屬的一種，分布在孟加拉國、印度、印度尼西亞、老撾、馬來西亞、緬甸、菲律賓、新加坡、泰國等地，屬于世界瀕危保護(hù)樹種，馬來沉香是沉香的主要來源。以往一般通過理化鑒別和顯微觀察橫切面法對(duì)沉香進(jìn)行鑒別。

傳統(tǒng)的木材鑒定識(shí)別方法是利用人工經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行識(shí)別，主要通過對(duì)木材截面進(jìn)行人工觀察的方式完成。一般情況下依賴肉眼和放大鏡進(jìn)行宏觀識(shí)別，而微觀識(shí)別則需要使用光學(xué)顯微鏡觀察其內(nèi)部的解剖結(jié)構(gòu)特征，也就是觀察構(gòu)成木材的各類細(xì)胞與組織的形態(tài)及排列特征，該方法涉及的識(shí)別特征較多，鑒定相對(duì)準(zhǔn)確，但對(duì)于鑒定工作者的要求很高，要對(duì)此做出準(zhǔn)確的鑒定，必須具有豐富的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。近年來研究工作者開發(fā)了基于數(shù)字圖像處理的木材圖像識(shí)別技術(shù)，大大提高了木材識(shí)別的準(zhǔn)確性,推動(dòng)了木材識(shí)別技術(shù)的發(fā)展。但是，無論是基于識(shí)別者經(jīng)驗(yàn)的傳統(tǒng)識(shí)別技術(shù)還是基于計(jì)算機(jī)圖像檢索的識(shí)別技術(shù)，都沒有脫離木材本身的形態(tài)結(jié)構(gòu)及特征，鑒定識(shí)別工作都必須建立在所檢木材有完整易辨識(shí)的形態(tài)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，這就為木材識(shí)別工作帶來了一定的局限性，同時(shí)，相近種屬木材易出現(xiàn)材質(zhì)結(jié)構(gòu)的相似，為木材識(shí)別的準(zhǔn)確性帶來困難。

因此建立起以馬來沉香的DNA條形碼技術(shù)為基礎(chǔ)的分子鑒定方法，實(shí)現(xiàn)馬來沉香的簡單、快速、準(zhǔn)確、客觀的鑒定是目前急需解決的問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種用于用于馬來沉香鑒定的基因檢測(cè)引物和探針，所述引物和探針序列包括：

MLCX Primer-F：5'- TCCCGTTCGCTACTTTGACT -3'

MLCX Primer-R：5'- GCTATCCCGACCCTTACCA -3'

MLCX Primer Probe ：5'-VIC- TTGACATACACCCAAGC -MGB-3'。

進(jìn)一步地，所述引物和探針的PCR反應(yīng)條件為：95℃，2min；95℃ 15s，55℃ 34s，共40個(gè)循環(huán)。

進(jìn)一步地，所述引物和探針的使用濃度比為：MLCX Primer-F:MLCX Primer-R:MLCX Primer Probe=1:1:2。

本發(fā)明還提供了一種用于馬來沉香的分子鑒定的方法，包括如下步驟：

（1）木材樣本的預(yù)處理；

（2）提取經(jīng)（1）處理后的木材樣本中的 DNA；

（3）利用引物MLCX Primer-F和MLCX Primer-R，以及探針MLCX Primer Probe對(duì)（2）中提取的DNA進(jìn)行熒光PCR擴(kuò)增；

（4）木材種類的確定；

所述引物和探針序列包括：

MLCX Primer-F：5'- TCCCGTTCGCTACTTTGACT -3'

MLCX Primer-R：5'- GCTATCCCGACCCTTACCA -3'

MLCX Primer Probe ：5'-VIC- TTGACATACACCCAAGC -MGB-3'。

進(jìn)一步地，所述的熒光PCR擴(kuò)增條件為：95℃，2min；95℃ 15s，55℃ 34s，共40個(gè)循環(huán)。