[發明專利]一種培養戊型肝炎病毒的方法

在審

• 申請號: 201510514532.1
• 申請日: 2015-08-21
• 公開（公告）號: CN105062979A
• 公開（公告）日: 2015-11-18
• 發明（設計）人: 黃芬;畢艷紅;楊臣臣;趙顯晨;馬天武;井申榮
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種培養戊型肝炎病毒的方法，其特征在于按如下步驟進行：

（1）將HEV病毒溶液經0.22μm濾膜過濾除菌后，加入病毒溶液體積1～2%的雙抗溶液，4℃處理1h，-80℃保存備用，經Real-timeqPCR測定其病毒拷貝數為2×10⁵～2×10⁶拷貝數/mL，其中雙抗溶液為含有400U/mL青霉素和1000U/mL鏈霉素的溶液；

（2）將A549細胞按2×10⁵/孔接種至6孔板中，用含質量百分比10%胎牛血清的DMEM培養基在37℃、5%CO₂培養箱中靜止培養細胞，直至細胞長成單層；

（3）將步驟（2）的HEV病毒懸液按每孔100μL接種至單層細胞中，置37℃孵育1小時，每15min輕微搖勻一次，使病毒充分吸附到細胞上；棄上清，1×PBS洗滌細胞3次，加入含質量百分比2～5%孕晚期血清的DMEM培養基，同時添加終濃度為0.01mMMgCl₂保護病毒顆粒的完整性及增強病毒與細胞的吸附作用，置于37℃、5%CO₂培養箱中繼續培養；

（4）接種HEV病毒6天后A549細胞出現病變現象，反復凍融，收集病變細胞及培養液，-80℃保存待用。