[發(fā)明專利]一種中大型植物外植體的滅菌方法

有效

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• 申請日: 2015-08-19
• 公開（公告）號: CN105148299B
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發(fā)明（設計）人: 趙泓;王賢;王永勤
• 申請（專利權）人: 北京市農林科學院
• 主分類號: A61L2/18
• 分類號: A61L2/18;A61L2/04;A61L101/34
• 代理公司: 北京五洲洋和知識產權代理事務所(普通合伙) 11387
• 代理人: 劉春成;王蔚林

本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領域，具體涉及一種中大型植物外植體的滅菌方法。所述滅菌方法包括：浸泡步驟：將外植體在乙醇溶液中進行浸泡處理，得到浸泡后的外植體；灼燒步驟：將所述浸泡后的外植體進行灼燒處理，得到滅菌后的外植體。本發(fā)明無需采用次氯酸鈉溶液、升汞溶液等對外植體進行消毒，無需對大量蒸餾水進行高壓滅菌，所以操作簡單、節(jié)省試劑、成本低廉、對環(huán)境友好，使用范圍廣泛，應用價值高。

技術領域

本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)領域，具體涉及一種中大型植物外植體的滅菌方法。

背景技術

外植體的有效滅菌是所有植物組織培養(yǎng)的重要一步。植物組織培養(yǎng)是指從植物體上截取需要的細胞、組織或器官，通過無菌操作，在人為調控下進行培養(yǎng)，廣泛應用于瀕危、稀有植物的長期保存、經濟植物的快速繁殖、遠源雜交畸形胚或未成熟胚胎的挽救、培養(yǎng)，新型種質資源的創(chuàng)造(DH、基因工程、細胞融合)、脫毒復壯等領域。

與醫(yī)療器械、食品加工等行業(yè)的消毒不同，保持外植體在消毒后依然具有較高的生命力是植物組織培養(yǎng)必須要堅守的原則。物理消毒法，如輻射消毒、高溫、高壓、蒸汽滅菌等都會導致外植體死亡。因此組織培養(yǎng)領域對外植體的消毒方法均是采用化學法。從植物組織培養(yǎng)消毒技術誕生至今，相關的科研人員都在探索使用何種化學試劑才能到達有效滅菌的目的。

常用的化學試劑有乙醇、次氯酸鈉、氯化汞(升汞)、過氧化氫、次氯酸鈣和硝酸銀。氯化汞較難在隨后的洗滌過程中去除，且對外植體有毒副作用。過氧化氫是強氧化劑，滴落到皮膚后會有灼傷感。氯化汞和過氧化氫作用較強，如果濃度稍大或時間略長，外植體很容易死亡。次氯酸鈣容易吸收空氣中的水分，影響滅菌效果。硝酸銀也是強氧化劑，但滅菌能力不如氯化汞和過氧化氫，價格又比乙醇和次氯酸鈉貴，所以較少采用。綜合滅菌效果、安全系數和價格因素，乙醇和次氯酸鈉是目前最為廣泛使用的化學試劑。

乙醇和次氯酸鈉組合使用可以滿足一般常見外植體的消毒要求。目前植物外植體的通用消毒方法是：體積百分比濃度為75％的乙醇表面處理20秒-90秒后，再用體積百分比濃度為2-15％次氯酸鈉水溶液消毒8-20分鐘，再用無菌蒸餾水漂洗2-4次，每次1-2分鐘。采用該消毒方法，需要對大量蒸餾水進行高壓滅菌以制備得到無菌蒸餾水。如果不能達到滅菌效果，再使用其它的化學試劑。

有些中大型外植體，如百合果實、茄果類幼果、葫蘆科幼果、薯蕷科塊莖等等體積較大，一般長度或者長徑超過4cm，采用目前業(yè)界通用的消毒技術，有以下幾個缺點：1、受滅菌器材的限制，每次只能對幾個外植體進行消毒，滅菌效率低下；2、內部具較大空腔的外植體，如百合果實，內部空腔體積大，比重輕，密度小，在整個消毒過程中均漂浮在液體表面，容易導致表面消毒不完全，從而造成污染；3、薯蕷科塊莖在土中生長，攜帶多種、大量菌類，不易徹底消毒，采用傳統(tǒng)滅菌方法的滅菌效率低下。

因此，植物組織培養(yǎng)領域需要研發(fā)出一種針對于中大型植物外植體的、快速高效的、成本低廉的、操作簡單的滅菌方法。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供一種中大型植物外植體的滅菌方法，該方法將外植體先用乙醇溶液浸泡，再在火焰中灼燒并冷卻。

本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的：

一種中大型植物外植體的滅菌方法，包括以下步驟：

浸泡步驟：將外植體在乙醇溶液中進行浸泡處理，得到浸泡后的外植體；

灼燒步驟：將所述浸泡后的外植體進行灼燒處理，得到滅菌后的外植體。

上述滅菌方法的優(yōu)選的實施方式中，所述外植體的長度或長徑大于等于4cm，小于等于15cm。

上述滅菌方法的優(yōu)選的實施方式中，所述外植體為百合果實、番茄幼果、茄子幼果、西瓜幼果、薯蕷塊莖。

上述滅菌方法的優(yōu)選的實施方式中，所述浸泡步驟中，所述浸泡處理的時間為1-5秒，優(yōu)選為1-3秒。