[發明專利]一種嗜熱毛殼菌纖維素酶在拋光染色一浴工藝中的應用

有效

• 申請號: 201510503973.1
• 申請日: 2015-08-17
• 公開（公告）號: CN105155167B
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 張揚;李新良;張民
• 申請（專利權）人: 湖南尤特爾生化有限公司;上海尤特爾生化有限公司
• 主分類號: D06B3/02
• 分類號: D06B3/02;D06B23/00;D06B23/22;C12N9/42
• 代理公司: 上海浦一知識產權代理有限公司31211
• 代理人: 王函

1.一種嗜熱毛殼菌纖維素酶在拋光染色一浴工藝中的應用，其特征在于，在鹽濃度為10g/L～90g/L和溫度為57～63℃條件下使用所述嗜熱毛殼菌纖維素酶和染料進行拋光染色一浴，所述嗜熱毛殼菌纖維素酶按如下方法制得：

1)嗜熱毛殼菌纖維素酶基因的合成，合成的嗜熱毛殼菌纖維素酶基因的序列如SEQ ID NO.2所示,合成的基因編碼更加符合里氏木霉高效表達的基因編碼；

2)嗜熱毛殼菌纖維素酶表達質粒的構建；

3)里氏木霉的轉化與嗜熱毛殼菌纖維素酶高產菌株的篩選，得到的嗜熱毛殼菌纖維素酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，分泌到細胞外的嗜熱毛殼菌纖維素酶為SEQ ID NO.3所示序列的第22-314位氨基酸序列；步驟3)具體為：首先，用EcoRI降解步驟2)構建的質粒形成質粒片段，采用化學轉化方法將該質粒片段轉入里氏木霉RUT C-30宿主細胞；然后在含有潮霉素B的PDA培養基上培養，再將生長旺盛的菌落接種置PDA培養基上，通過生長和發芽，將孢子再轉移到新鮮PDA培養基上，以分離純化轉代穩定的轉化子，將這些轉化子的孢子接種在木霉纖維素酶誘導培養液，培養后，采樣離心，取上清液進行SDS-PAGE電泳分析；所述木霉纖維素酶誘導培養液的pH值為4.8，用乳糖作為誘導物。

2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述鹽為NaCl、Na₂SO₄中的一種或多種。

3.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述嗜熱毛殼菌纖維素酶在拋光染色一浴中的最適作用溫度為60℃。

4.一種嗜熱毛殼菌纖維素酶在拋光染色一浴工藝中的應用，其特征在于，在鹽濃度為10g/L～90g/L和溫度為57～63℃條件下使用所述嗜熱毛殼菌纖維素酶和染料進行拋光染色一浴，所述嗜熱毛殼菌纖維素酶按如下方法制得：

1)嗜熱毛殼菌纖維素酶基因的合成，合成的嗜熱毛殼菌纖維素酶基因的序列如SEQ ID NO.4所示；

2)嗜熱毛殼菌纖維素酶表達質粒的構建；

3)畢赤酵母的轉化與嗜熱毛殼菌纖維素酶高產菌株的篩選，得到的嗜熱毛殼菌纖維素酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；步驟3)具體為：首先，用Spe I限制性內切酶將步驟2)構建的表達質粒切開后，直接轉化畢赤酵母菌；隨即挑選多個白色畢赤酵母菌落、培養、誘導后，將菌體與培養液分離，培養液通過SDS-PAGE電泳分析。

5.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述鹽為NaCl、Na₂SO₄中的一種或多種。

6.如權利要求4所述的應用，其特征在于，所述嗜熱毛殼菌纖維素酶在拋光染色一浴中的最適作用溫度為60℃。