[發明專利]一種抑制survivin基因表達的siRNA分子及其用途

在審

• 申請號: 201510496979.0
• 申請日: 2015-08-13
• 公開（公告）號: CN105002183A
• 公開（公告）日: 2015-10-28
• 發明（設計）人: 謝晶;孫亞廳;李劍光;滕樂生;孟慶繁;逯家輝;劉艷;權宇彤;張洋
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/63;A61K31/713;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 北京金信知識產權代理有限公司 11225
• 代理人: 劉鋒;鄭丹

技術領域

本發明公開一種抑制survivin基因表達的雙鏈siRNA分子，同時還提供了siRNA分子的醫用用途，屬于生物醫藥技術領域。

背景技術

惡性腫瘤嚴重威脅著人類的生命健康，其死亡率僅次于心腦血管疾病；盡管各種的治療方法不斷出現，但目前還沒有找到真正有效的根治方法，腫瘤的治療一直是長期困擾醫學界的世界性難題。逃避凋亡是所有腫瘤的特征，它使得腫瘤細胞在異常生長刺激下存活，并抵抗化療和放療。抗凋亡蛋白survivin通過與凋亡信號作用成為新的最有潛能的治療靶標來抑制腫瘤細胞的生長。

RNA干擾(RNA?interference，RNAi)現象是一種在進化上保守的抵御轉基因或外來病毒侵犯的防御機制，是一種序列特異性的轉錄后基因沉默。具體是指雙鏈RNA(double?strand?RNA,dsRNA)指導的，在特定酶參與下，以外源或內源mRNA為降解目標，在轉錄后水平上使特異性靶基因發生的沉默現象，即基因沉默。該項技術的發現為疾病治療尤其是癌癥的治療開辟了全新的途徑，為科研工作者提供了一個全新的基因治療理念。應用RNA干擾技術，用靶向至是survivin基因的siRNA作為靶向藥物，在基因的轉錄后進行干擾，從而誘導腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤細胞的有絲分裂，抑制腫瘤轉移時的血管形成和降低腫瘤細胞放化療的耐受性，對腫瘤進行抑制，在不久的將來可能成為一種新的腫瘤治療方法。

發明內容

本發明公開一種抑制survivin基因表達的雙鏈siRNA分子及其醫用用途，是一種新的siRNA序列，可以抑制腫瘤細胞的增殖和轉移。

本發明所述的雙鏈siRNA分子，其特征在于一種高效靶向survivin基因的廣譜雙鏈的小分子干擾RNA(siRNA)，由下述核苷酸序列的正義鏈的和反義鏈組成：

正義鏈5＇-CGGCUGUUCCUGAGAAAUATT-3＇(SEQ?ID?NO:1)

反義鏈5＇-UAUUUCUCAGGAAGAGCCGAG-3＇(SEQ?ID?NO:2)

根據本發明的另一方面，本發明還提出了一種雙鏈siRNA分子，由下述核苷酸序列的正義鏈的和反義鏈組成：

正義鏈5＇-CGGCUGUUCCUGAGAAAUATTXX-3＇(SEQ?ID?NO:3)

反義鏈5＇-UAUUUCUCAGGAAGAGCCGAGYY-3＇(SEQ?ID?NO:4)

其中，XX和YY各自獨立的選自tt、TT或UU，t代表脫氧胸腺嘧啶核糖核苷酸，T代表胸腺嘧啶核糖核苷酸，U代表尿嘧啶核糖核苷酸。

優選的，XX為tt、YY為tt，即所述雙鏈siRNA分子，由下述核苷酸序列的正義鏈的和反義鏈組成：

正義鏈5＇-CGGCUGUUCCUGAGAAAUATTtt-3＇(SEQ?ID?NO:5)

反義鏈5＇-UAUUUCUCAGGAAGAGCCGAGtt-3＇(SEQ?ID?NO:6)

本發明所述的雙鏈siRNA分子的主干序列即為SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示的核苷酸序列，即前面所述的正義鏈和反義鏈分別具有SEQ?ID?NO:1和2所示的核苷酸序列的雙鏈分子。

本發明的siRNA分子來源于針對survivin基因開放閱讀框的功能保守區而制備的siRNA分子庫，其優點在于所制備的siRNA隨機分布于survivin基因開放閱讀框區段，長度可控性分布于19-23bp，可以提高有效靶點的命中率。

本發明還提出了一種siRNA表達質粒，所述siRNA表達質粒包含前面所述的任意一種雙鏈siRNA分子的序列。由此，利用所述siRNA表達質粒轉染動物細胞，能夠有效的沉默surivivin基因，進而誘導細胞凋亡、抑制腫瘤細胞分裂、抑制腫瘤血管的生成，從而能夠有效的治療腫瘤。進一步，該siRNA分子與siRNA表達質粒能夠有效的用于抗腫瘤藥物的制備，從而利用制備的抗腫瘤藥物對患者進行給藥，有效的治療腫瘤。

根據本發明還提出了一種survivin基因沉默試劑盒，所述試劑盒包含前面所述的任意一種雙鏈siRNA分子或siRNA表達質粒。利用本發明的試劑盒能夠有效的將腫瘤患者的細胞進行survivin基因沉默，從而能夠有效的治療腫瘤。

本發明的siRNA分子可以作為抗腫瘤藥物的有效成分，腫瘤疾病包括乳腺癌、肺癌、肝癌、白血病、胃癌、宮頸癌、膀胱癌、皮膚鱗癌、口腔上皮癌、結直腸癌、胰腺癌、多發性骨髓瘤、前列腺癌、黑色素瘤或骨肉瘤。