[發(fā)明專利]金霉素菌種選育培養(yǎng)基及菌種選育方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510485721.0
• 申請日: 2015-08-07
• 公開（公告）號: CN104988103A
• 公開（公告）日: 2015-10-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝昌賢;李蘭枝;劉運添;王鵬飛
• 申請（專利權(quán)）人: 金河生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/485
• 代理公司: 北京同恒源知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體涉及一種金霉素菌種選育培養(yǎng)基及菌種選育方法。

背景技術(shù)

金霉素是金色鏈霉菌(streptomyces?aureofaciens)的次級代謝產(chǎn)物，為四環(huán)類抗生素，常作為飼料添加劑，對革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌、螺旋體、衣原體、枝原體、立克次氏體等均具有抗菌作用，是一種廣譜抗菌素，既可抗病，又可增肥，不良反應(yīng)較小。隨著生物制藥領(lǐng)域?qū)λ沫h(huán)類抗生素的研究日趨深入，目前以鹽酸金霉素和飼料級金霉素為核心的金霉素產(chǎn)品非常適應(yīng)國內(nèi)外養(yǎng)殖環(huán)境，越來越多的飼料廠把金霉素作為抗生素的首選藥品，使其市場容量越來越大，銷售前景較為樂觀。因此提高金霉素發(fā)酵水平，提高經(jīng)濟效益，勢在必行。

金色鏈霉菌屬放線菌，一般以孢子的形式保存。由于該菌種選育程序要經(jīng)過分離、初篩、復(fù)篩、穩(wěn)定性試驗，因此選育時間較長，一般在3-6個月之間。另外，進行一次菌種選育挑選菌落一般在50-500個左右，因此搖瓶試驗的工作量較大，周期較長。目前，國內(nèi)金霉素菌種的選育在初篩階段一般采取二級發(fā)酵模式，即將分離好的菌落接入斜面，將生長好的斜面孢子接入種子搖瓶后，培養(yǎng)22-26小時，取生長好的種子液接種發(fā)酵瓶，培養(yǎng)5天后放瓶，測定效價。由于初篩種子瓶—發(fā)酵瓶是一對一，挑選的菌落越多，需要的搖瓶也越多，工作量就越大，占用的搖床也就越多。很顯然，上述方法越來越不經(jīng)濟，甚至成為金霉素生產(chǎn)發(fā)展的瓶頸，因此，有必要對現(xiàn)有技術(shù)予以改進。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種金霉素菌種選育培養(yǎng)基及菌種選育方法，通過本發(fā)明的改進，將菌種選育階段的二級發(fā)酵模式改為一次性發(fā)酵，縮短了菌種選育時間，提高了菌種選育效率。

本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：

1、金霉素菌種選育培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計，由以下組分組成：玉米淀粉6.0～7.5％、黃豆餅粉3.5～4.5％、酵母粉0.15～0.25％、碳酸鈣0.55～0.65％、硫酸銨0.3～0.4％、氯化鈉0.2～0.3％、硫酸鎂0.02～0.03％、磷酸二氫鉀0.02～0.03％，豆油2.86～4.28％，余量為水。

優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計，由以下組分組成：玉米淀粉6.0％、黃豆餅粉4.0％、酵母粉0.2％、碳酸鈣0.6％、硫酸銨0.35％、氯化鈉0.25％、硫酸鎂0.02％、磷酸二氫鉀0.03％、豆油4.28％，余量為水。

優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計，由以下組分組成：玉米淀粉7.0％、黃豆餅粉3.5％、酵母粉0.25％、碳酸鈣0.65％、硫酸銨0.3％、氯化鈉0.2％、硫酸鎂0.025％、磷酸二氫鉀0.025％、豆油2.86％，余量為水。

2、利用上述金霉素菌種選育培養(yǎng)基選育菌種的方法，培養(yǎng)基配制好后，按照7：50的體積比裝入瓶中進行滅菌，滅菌條件為0.090～0.105Mpa、120±1℃滅菌30分鐘；滅菌完畢后，按試管斜面菌種量的1/20接種，并在220～260轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，30±1.5℃恒溫培養(yǎng)6天。

本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明通過改進金霉素菌種選育過程中的培養(yǎng)基配方，將現(xiàn)有技術(shù)中的種子培養(yǎng)、種子發(fā)酵培養(yǎng)二級發(fā)酵模式變?yōu)橐淮涡园l(fā)酵模式，不僅大大縮短了菌種選育時間，提高了菌種選育效率，還減少了搖瓶和搖床的使用量，降低了成本，降低了菌種被污染的幾率，因此，本發(fā)明適合大批量菌種篩選。

具體實施方式

下面對本發(fā)明的優(yōu)選實施例進行詳細的描述。實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。

實施例1

改進后的金霉素菌種選育培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計，由以下組分組成：

玉米淀粉6.0％、黃豆餅粉4.0％、酵母粉0.2％、碳酸鈣0.6％、硫酸銨0.35％、氯化鈉0.25％、硫酸鎂0.02％、磷酸二氫鉀0.03％、豆油4.28％，余量為水。

按35mL/250mL三角瓶的量裝入培養(yǎng)基，4g棉塞，二層紗布將瓶口封好，于0.090～0.105Mpa、120±1℃滅菌30分鐘。

滅菌完畢后，接種方法：挖塊法約1cm²(試管斜面的1/20)，在220～260轉(zhuǎn)/分旋轉(zhuǎn)搖瓶機30±1.5℃恒溫培養(yǎng)6天。培養(yǎng)完畢的發(fā)酵液呈深棕褐色，稠，pH5.6-7.6，效價不低于16000U/ml，可直接進入下一選育程序。

實施例2

改進后的金霉素菌種選育培養(yǎng)基按質(zhì)量百分比計，由以下組分組成：