[發(fā)明專利]一種多級(jí)膜分離技術(shù)制備海蜇活性糖蛋白的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510479968.1
• 申請(qǐng)日: 2015-08-07
• 公開（公告）號(hào): CN105037486A
• 公開（公告）日: 2015-11-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃文文;易瑞灶;洪碧紅;孫繼鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國(guó)家海洋局第三海洋研究所
• 主分類號(hào): C07K1/34
• 分類號(hào): C07K1/34;C07K1/14
• 代理公司: 廈門市新華專利商標(biāo)代理有限公司 35203
• 代理人: 渠述華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種海蜇糖蛋白的制備方法，尤其是一種經(jīng)過多級(jí)膜系統(tǒng)分離純化的糖蛋白的方法。

背景技術(shù)

海蜇，為海生肛腸動(dòng)物，產(chǎn)于我國(guó)沿海各地。按產(chǎn)地分，有南蜇、東蜇、北蜇等品種，以福建、浙江所產(chǎn)最好。調(diào)查顯示，21世紀(jì)頭三年福建沿海海蜇年漁獲量都在10000t以上。海蜇營(yíng)養(yǎng)極為豐富，其體內(nèi)含有較多的蛋白質(zhì)及鈣、磷、碘、鐵等無機(jī)鹽，素有“水產(chǎn)瑰寶”之美稱。海蜇不僅可以食用，還是一味治病良藥。《本草綱目》中所述，海蜇有清熱解毒、化痰軟堅(jiān)、降壓消腫等功效，對(duì)氣管炎、哮喘、高血壓、胃潰瘍等癥均有療效。因此，海蜇作為一種醫(yī)食同源的大型生物，其有著重要的經(jīng)濟(jì)和食用價(jià)值。

大量文獻(xiàn)資料報(bào)道，海蜇活性肽及活性糖蛋白的分離純化方法，大都采用提取后醇沉、離心的方法，雜質(zhì)較多，分子量分布廣泛，因而存在提取過程繁瑣，成本較高，分子量不明確等問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種工序簡(jiǎn)單，易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)的多級(jí)膜分離技術(shù)制備海蜇活性糖蛋白的方法，可獲得含量＞80.0%，分子量約為26kD，具有明顯的抑制ACE酶活性及抑制溶壁微球菌的作用的海蜇糖蛋白。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的解決方案是：

一種多級(jí)膜分離技術(shù)制備海蜇活性糖蛋白的方法，其步驟包括：

（1）原料的處理：選取新鮮海蜇或者鹽漬海蜇為原料，采用組織攪碎機(jī)絞碎并用攪拌機(jī)攪拌勻漿成糜；

（2）提取：處理后的原料裝入提取罐，加入0.3%-0.9%NaCl溶液攪拌提取，料液比W:V為1:1-1:5，溫度控制25-75℃，攪拌提取、離心取上清；

（3）分離純化：上清液采用多級(jí)膜系統(tǒng)處理，除去大分子量及小分子量雜質(zhì)，得到目標(biāo)糖蛋白濃縮液；

（4）干燥：對(duì)糖蛋白濃縮液進(jìn)行干燥，制得海蜇活性糖蛋白粉末。

所述步驟2是攪拌提取2-7h，以4000-14000rpm的轉(zhuǎn)速離心取上清。

所述步驟4是采用噴霧干燥的方式對(duì)糖蛋白濃縮液進(jìn)行干燥。

所述步驟3進(jìn)一步在糖蛋白濃縮液加入乙醇配置成乙醇溶液，冷藏靜置，離心，得到分子量約為26kD的糖蛋白固體。

所述步驟3是加入乙醇配置成50%-75%的乙醇溶液，4-15℃冷藏靜置，以轉(zhuǎn)速為8000-10000rpm離心。

所述步驟4是采用冷凍干燥的方式對(duì)糖蛋白糖蛋白固體進(jìn)行干燥，制得海蜇活性糖蛋白粉末。

所述步驟3中多極膜系統(tǒng)包括順次連接的膜過濾單元，每個(gè)膜過濾單元包括一個(gè)膜過濾器，沿物料過濾方向，膜過濾器的膜孔徑逐級(jí)升高或降低；膜過濾器的入口端經(jīng)泵連接有大物料罐，膜過濾器的出口端為取樣口。

采用上述方案后，本發(fā)明可綠色高效的分離純化海蜇活性糖蛋白，可除去無活性的大分子及小分子雜質(zhì)，提高了糖蛋白樣品的生物活性，為開發(fā)高附加值的海蜇產(chǎn)品提供有效方法，為醫(yī)藥、功能性食品、化妝品等方面的應(yīng)用提供了技術(shù)基礎(chǔ)。

本發(fā)明制備的海蜇糖蛋白具有明顯的抑制ACE酶活性及抑制溶壁微球菌的作用。這種糖蛋白具有明顯的降壓及抑菌活性。

本發(fā)明采用多級(jí)膜系統(tǒng)分離純化，除去大分子及小分子雜質(zhì)，鎖定活性分子片段，提高了海蜇的生物利用活性，且測(cè)定了此片段物質(zhì)為糖蛋白。并且多級(jí)膜系統(tǒng)操作方便、綠色環(huán)保、經(jīng)濟(jì)高效，利于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的闡述。

本發(fā)明揭示了一種多級(jí)膜分離技術(shù)制備海蜇活性糖蛋白的方法，包含以下步驟：

（1）原料的處理：選取新鮮海蜇或者鹽漬海蜇為原料，采用組織攪碎機(jī)絞碎并用攪拌機(jī)攪拌勻漿成糜；

（2）提取：處理后的海蜇糜原料裝入提取罐，加入0.3%-0.9%NaCl溶液攪拌提取，料液比W:V為1:1-1:5，溫度控制25-75℃，攪拌提取2-7h，4000-14000rmp離心取上清；

（3）分離純化：上清液采用多級(jí)膜系統(tǒng)處理，此多極膜系統(tǒng)包括順次連接的膜過濾單元，每個(gè)膜過濾單元包括一個(gè)膜過濾器，沿物料過濾方向，膜過濾器的膜孔徑逐級(jí)升高或降低；膜過濾器的入口端經(jīng)泵連接有大物料罐，膜過濾器的出口端為取樣口，經(jīng)過去雜濃縮得到目標(biāo)糖蛋白濃縮液，加入乙醇配置成75%乙醇溶液，4-15℃冷藏靜置，8000-10000rpm離心10-20min，得到分子量約為26kD的糖蛋白固體；

（4）干燥：采用冷凍干燥的方法對(duì)糖蛋白固體進(jìn)行干燥，制得海蜇活性糖蛋白粉末；所述的冷凍干操作為常規(guī)操作，可在任意型號(hào)的凍干機(jī)中進(jìn)行。