[發明專利]適用于免疫細胞大規模培養的無血清培養基

有效

• 申請號: 201510475661.4
• 申請日: 2015-08-05
• 公開（公告）號: CN105039253B
• 公開（公告）日: 2019-02-19
• 發明（設計）人: 葛嘯虎;陳海佳;王一飛;羅二梅;王小燕
• 申請（專利權）人: 廣州賽萊拉干細胞科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;C12N5/0784
• 代理公司: 廣州圣理華知識產權代理有限公司 44302
• 代理人: 頓海舟;王鴿

本發明公開了適用于免疫細胞大規模培養的無血清培養基，屬于細胞生物學與醫學免疫學領域。所述無血清培養基以RPMI1640培養基為基礎，還含有添加成分，所述添加成分為羥乙基哌嗪硫磺酸、酚紅·鈉、L?谷氨酸鹽、碳酸氫鈉，還可以添加胰島素、轉鐵蛋白、硒、人血白蛋白、白介素?2。本發明所含成分均為化學限定成分，不含任何動物血清成分，適用于對所有免疫細胞進行大規模培養、臨床安全性高，且增殖效果更好。

技術領域

本發明屬于細胞生物學與醫學免疫學領域，具體涉及一種適用于所有免疫細胞培養的無血清培養基。

背景技術

隨著免疫細胞生物學及免疫分子生物學的高速發展，體細胞免疫治療已成為腫瘤患者放、化療后輔助治療的重要手段之一，其對于促進患者免疫系統的重建、消除殘留病灶及骨髓凈化都具有良好效果。

體細胞免疫治療，是向腫瘤患者輸入具有抗腫瘤活性的免疫細胞，直接殺傷腫瘤或激發機體抗腫瘤免疫反應，從而達到治療效果的生物療法。體外操作包括細胞在體外的傳代、擴增、修飾、篩選及經藥物或其他能改變細胞生物學行為的處理。經體外操作后的體細胞可用于腫瘤治療，也可用于腫瘤預防。

自體細胞免疫療法，主要包括樹突狀細胞疫苗(DC)、CIK、DC刺激的CIK細胞(DC-CIK)、自然殺傷細胞(NK)、NKT細胞等。具體方法是：通過提取患者體內不通過提取患者體內不成熟的免疫細胞(采血)，在實驗室中進行活化培養使其具有高效識別和殺滅腫瘤細胞的能力后，再回輸患者體內。患者只需配合做采血與回輸血兩個步驟。

目前，血清仍是免疫細胞培養中最基本的的添加物，尤其是在細胞生長狀況不良時，常常會先使用有血清的培養液進行培養，待細胞生長旺盛以后，再換成無血清培養液。無血清培養基和試劑被廣泛的應用于培養哺乳動物和無脊椎動物細胞，以制備單克隆抗體，病毒抗原和重組蛋白等。然而，由于動物血清中含有動物成分，且成分復雜，雖含很多對細胞有利的成分，也含有對細胞有害的成分，如多胺氧化酶等，若其用于臨床細胞治療體系中，可能會導致一些潛在的風險。而且在大規模生產中，血清來源越來越困難，價格昂貴，是構成動物細胞培養對生產成本的主要部分之一。在此背景下，急需一種安全有效的免疫細胞無血清培養基來提高臨床免疫細胞培養的安全性及有效性。

目前，使用最廣泛的無血清培養基主要是LONZA的X VIVO無血清培養基和GIBCO的AIM無血清培養基，但是上述兩種培養基均需在細胞培養前期補充自體血漿，否則培養免疫細胞時，難以達到臨床的回輸標準，且培養時間均較長。

發明內容

針對上述現有的無血清培養基的缺陷，本發明提供了一種適用于培養免疫細胞大規模培養的無血清培養基。本發明的目的在于克服現有技術的缺點，提供了一種適用于免疫細胞大規模培養的無血清培養基。本發明制備的無血清培養基可應用于所有免疫細胞的培養，不需要腫瘤細胞的刺激，不需要補加胎牛血清，提高了臨床安全性。且運用本發明的無血清培養基培養免疫細胞時，增殖效果更好，培養時間更短，同時也大大地降低了生產成本。

為達到上述目的，本發明采用了下述技術方案：

一種適用于免疫細胞大規模培養的無血清培養基，以RPMI 1640培養基為基礎，還含有添加成分，所述添加成分為羥乙基哌嗪硫磺酸、酚紅·鈉、L-谷氨酸鹽、碳酸氫鈉。

優選的，所述添加成分的濃度為：羥乙基哌嗪硫磺酸3-9/L、酚紅·鈉0.0001-0.1g/L、 L-谷氨酸鹽0.1-1g/L、碳酸氫鈉0.5-8g/L。

進一步優選的，所述添加成分的濃度為：羥乙基哌嗪硫磺酸5-7g/L、酚紅·鈉0.002-0.01 g/L、L-谷氨酸鹽0.2-0.6g/L、碳酸氫鈉1-5g/L。

進一步優選的，所述添加成分的濃度為：羥乙基哌嗪硫磺酸5.958g/L、酚紅·鈉0.0053 g/L、L-谷氨酸鹽0.4g/L、碳酸氫鈉3g/L。