[發明專利]一種肺癌檢測試劑盒及其用途

在審

• 申請號: 201510475489.2
• 申請日: 2015-08-06
• 公開（公告）號: CN105039554A
• 公開（公告）日: 2015-11-11
• 發明（設計）人: 王偉;李芳瓊;孟冠敏;劉琴;姜凱;楊雙彪;陳文華;張捷
• 申請（專利權）人: 浙江省中醫藥研究院;上海之江生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 郭婧婧;許亦琳

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種以血清中miR-21、miR-205為標志物的肺癌檢測試劑盒，用于肺癌的篩查和術后的監測。

背景技術

肺癌是一種全球范圍內都很常見的癌癥，由于臨床表現已經是晚期，故有很高的致死率(Jemaletal,2010；Duffyetal,2007)。約有75％的肺癌患者在確診時已經是晚期或是癌細胞已經轉移，因此肺癌患者的5年生存率不到15％(Aberleetal,2011)。一些用于降低肺癌死亡率的篩查策略也被應用，如相對于胸透來說，重度吸煙者做LDCT篩查可使死亡率降低20％，但是很高的假陽性和高昂的成本使得LDCT不能成為一種好的篩查方法，我們仍然需要尋找別的篩查方法。

近年來，血清/血漿中microRNAs(miRNAs)成為新的研究熱點。miRNA在血清/血漿中可以穩定存在，表達量不受各種保存條件、保存時間的影響；血清/血漿miRNA的表達無年齡、性別的差異，且具有腫瘤特異性(Chenetal,2008)。因此，血清/血漿中microRNAs可能成為一種新的理想的非侵入性腫瘤標志物。

作為肺癌有前景腫瘤分子標志物，血清miRNA的檢測可對肺癌進行早期篩查診斷和預后輔助診斷，但肺癌有關特異性miRNA表達譜的篩選、檢測方法及檢測程序的標準化、穩定內參基因的選擇都是迫切需要解決的問題。血清中的miRNA含量遠低于組織，需要一種非常靈敏且特異的檢測方法；又由于miRNA引物序列短，引物設計比較困難，沒有針對性的軟件可以直接利用，故引物及體系均需篩選及優化過程。目前對miRNA的高通量篩查一般采用芯片技術，成本高、特異性和靈敏度有限，且不能滿足零散標本實時檢測需求；對少數miRNA的實時檢測多采用Taqman探針法，部分已形成商業化試劑盒產品，但成本和售價高昂。

發明內容

為了克服現有技術中的缺陷，本發明的目的在于提供miR-21與miR-205聯合作為肺癌生物標志物在制備或篩選肺癌診斷試劑中的用途。

本發明的另一目的在于提供一種肺癌診斷試劑盒。

本發明的另一目的在于提供一種診斷肺癌的方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：

本發明的第一方面，提供了miR-21與miR-205聯合作為肺癌生物標志物在制備或篩選肺癌診斷試劑中的用途。

較優的，所述miR-21與miR-205聯合作為肺癌血清生物標志物。

較優的，所述肺癌診斷試劑用于肺癌的判斷、治療方案的選擇、和/或預后評估。

較優的，所述肺癌為非小細胞肺癌。

將miR-21與miR-205聯合作為肺癌生物標志物用于制備肺癌診斷試劑，是指將miR-21與miR-205聯合作為基于檢測miR-21與miR-205含量的肺癌診斷試劑的標準品或陽性對照，用于樣本血清中的miR-21與miR-205的檢測。

將miR-21與miR-205聯合作為肺癌生物標志物用于篩選肺癌診斷試劑，是指將miR-21與miR-205作為靶標應用于肺癌診斷試劑的篩選。在另一優選例中，基于所述的miR-21與miR-205基因序列，篩選特異性針對miR-21的反轉錄引物、PCR擴增引物對、探針與特異性針對miR-205的反轉錄引物、PCR擴增引物對、探針從而作為檢測肺癌的試劑，來檢測樣本血清中的miR-21與miR-205水平。

本發明的第二方面，提供一種肺癌診斷試劑盒，包括特異性針對miR-21的反轉錄引物、PCR擴增引物對、探針與特異性針對miR-205的反轉錄引物、PCR擴增引物對、探針。

優選地，所述肺癌診斷試劑盒用于肺癌的判斷、治療方案的選擇、和/或預后評估。

優選地，所述肺癌為非小細胞肺癌。