[發明專利]改進的病毒純化方法

在審

• 申請號: 201510475203.0
• 申請日: 2005-10-21
• 公開（公告）號: CN105062980A
• 公開（公告）日: 2015-11-18
• 發明（設計）人: M.C.科菲
• 申請（專利權）人: 昂科利蒂克斯生物科技公司
• 主分類號: C12N7/02
• 分類號: C12N7/02;A61P35/00;A61K35/765
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李波;徐厚才

1.從細胞培養物生產病毒的方法，其包含下述步驟：

(a)提供已經被病毒感染的細胞培養物；

(b)將去污劑加入培養物，并溫育一段時間，以產生細胞裂解物，從而從細胞提取病毒；

(c)去除細胞碎片；和

(d)收集病毒。

2.權利要求1的方法，其中通過過濾去除細胞碎片。

3.權利要求1的方法，其中通過分步過濾去除細胞碎片，其包含：

(1)通過具有5μM或8μM孔徑的預過濾器，進行過濾；和

(2)在步驟(1)后，通過具有3μM和0.8μM孔徑的組合過濾器，進行過濾。

4.權利要求1的方法，其中通過分步過濾去除細胞碎片，其包含：

(1)通過具有5μM或8μM孔徑的預過濾器，進行過濾；和

(2)在步驟(1)后，通過具有0.8μM孔徑的過濾器，進行過濾。

5.權利要求1的方法，還包含用DNA剪切酶處理細胞裂解物。

6.權利要求2的方法，還包含濃縮濾液。

7.權利要求6的方法，其中通過滲濾濃縮濾液。

8.權利要求7的方法，其中使用具有300kDa分子量截止值的中空纖維筒進行滲濾。

9.權利要求1的方法，其中所述病毒是無包膜病毒。

10.權利要求1的方法，其中所述病毒是呼腸孤病毒。

11.權利要求10的方法，其中所述呼腸孤病毒是哺乳動物呼腸孤病毒。

12.權利要求11的方法，其中所述哺乳動物呼腸孤病毒是人呼腸孤病毒。

13.權利要求12的方法，其中所述人呼腸孤病毒是血清型3病毒。

14.權利要求13的方法，其中所述血清型3呼腸孤病毒是Dearing株。

15.權利要求10的方法，其中所述呼腸孤病毒是重組的呼腸孤病毒。

16.權利要求1的方法，其中所述細胞是人胚腎293(HEK293)細胞。

17.權利要求16的方法，其中所述HEK293細胞懸浮生長。

18.權利要求1的方法，還包含通過陰離子交換色譜純化病毒。

19.權利要求1的方法，還包含通過離子交換和大小排阻色譜的組合純化病毒。

20.權利要求19的方法，其中使用陰離子交換劑進行所述離子交換。

21.權利要求19的方法，其中在大小排阻色譜之前進行所述離子交換。

22.權利要求19的方法，其中在沒有鎂的情況下，進行所述離子交換和大小排阻色譜。

23.權利要求19的方法，其中在離子交換和大小排阻色譜中使用磷酸鹽緩沖液。

24.權利要求23的方法，其中所述磷酸鹽緩沖液包含50mM磷酸鈉，pH7.2。

25.一種組合物，其包含根據權利要求1收集的病毒。

26.權利要求25的組合物，其適合臨床施用。

27.權利要求26的組合物，還包含可藥用的賦形劑和/或載體。

28.生產感染性呼腸孤病毒的方法，其包含：

(a)提供已經被呼腸孤病毒感染的HEK293細胞的培養物；

(b)通過將辛基酚聚氧乙烯(9-10)醚至10加入培養物，并在約25℃至約37℃溫育，從細胞提取病毒；

(c)用DNA剪切酶處理來自步驟(b)的混合物；

(d)通過過濾去除細胞碎片；

(e)通過超濾或滲濾濃縮濾液；

(f)通過離子交換和大小排阻色譜的組合，純化呼腸孤病毒；和

(g)收集呼腸孤病毒。

29.權利要求28的方法，其中所述步驟(f)包含陰離子交換色譜和隨后的大小排阻色譜。

30.一種組合物，其包含根據權利要求28的方法制備的呼腸孤病毒。

31.權利要求30的組合物，還包含可藥用的賦形劑和/或載體。