[發(fā)明專利]一種植物根特異性啟動子及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510466125.8
• 申請日: 2015-07-31
• 公開（公告）號: CN104988153A
• 公開（公告）日: 2015-10-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳靜;徐登安;余懋群
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學院成都生物研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/10;C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11246
• 代理人: 裴娜

1.一種大麥根特異性啟動子，其特征在于，該啟動子是如下1)或2)或3)或4)的DNA分子：

1)由序列表中序列1所示的脫氧核糖核苷酸組成的DNA分子；

2)由序列表中序列2所示的脫氧核糖核苷酸組成的DNA分子；

3)與1)或2)限定的DNA序列雜交的DNA分子；

4)與1)或2)限定的DNA序列有90％以上的同源性且能調(diào)控目的基因在植物的根中特異表達的DNA分子。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的啟動子，其特征在于能有效驅(qū)動外源基因在植物根中特異性表達，所述啟動子克隆方法的步驟如下：

根據(jù)HvTIP2；1基因的mRNA轉(zhuǎn)錄起始位點上游序列，設(shè)計兩條上游引物1310F1(5′-AAGCTTCGAAGGAAAGGCATTAGAAA-3′)和1310F2(5′-AAGCTTCTGCATTATCAGACAGAACT-3′)以及一條共用的下游引物1310R(5′-CCATGGTGCGGATGATTACCACAA-3′)，并在上、下游引物5'端分別引入Hind?III和Nco?I限制性內(nèi)切酶位點；

以大麥基因組DNA為模版，利用上游引物分別與下游引物組成的引物對，通過PCR方法擴增兩條不同長度的啟動子片段。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的啟動子，其特征在于，所述PCR反應體系為：模板DNA?500ng，上、下游引物(10μM)各1μl，10×PCR?Buffer(Mg²⁺plus)2μl，dNTP?Mixture(2.5mM)1.6μl，Ex-Taq?DNA聚合酶(5U/μl)0.2μl，加雙蒸水至20μl。PCR程序為：98℃5min；94℃30s，55℃30s，72℃90s，35個循環(huán)；72℃延伸10min。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的啟動子，其特征在于，所述啟動子克隆方法進一步包括PCR產(chǎn)物的回收與質(zhì)粒重組，具體為：PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)2％的瓊脂糖凝膠電泳分離，將目的條帶的回收產(chǎn)物與pMD19-T載體連接，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細胞，經(jīng)藍白斑篩選獲得陽性克隆。

5.一種含有權(quán)利要求1-4任意一項所述啟動子的表達盒和表達載體。

6.一種含有權(quán)利要求1-4任意一項所述啟動子在培育目的基因根特異性表達植物中的應用。

7.一種含有權(quán)利要求1-4任意一項所述啟動子在轉(zhuǎn)基因植物新品種培育中的應用。