[發明專利]心肌肌鈣蛋白I均相酶免疫法測定試劑盒

有效

• 申請號: 201510465272.3
• 申請日: 2015-07-29
• 公開（公告）號: CN105137071B
• 公開（公告）日: 2017-08-11
• 發明（設計）人: 李銳;吳蓓蕾;唐霞蔚;包曉峰
• 申請（專利權）人: 溫州煦棠生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/566
• 分類號: G01N33/566
• 代理公司: 北京君智知識產權代理事務所(普通合伙)11305
• 代理人: 鄭明

技術領域

本發明涉及心肌肌鈣蛋白I均相酶免疫法測定試劑盒。本發明是應用作用于人心肌肌鈣蛋白I(cTnI)單肽鏈特定位點的抗體，及采用該抗體制備測定血清中心肌肌鈣蛋白I(cTnI)含量的均相酶聯免疫試劑的方法。該發明制備的試劑盒可用于半自動或全自動生發分析儀器，屬于醫學生物學領域。

背景技術

心肌肌鈣蛋白I(cTnI)是心肌損傷敏感及特異性最強的標志物之一，在急性心肌損傷及心肌炎中作為判斷心肌細胞損傷的金標準，也作為冠動脈綜合征危險分層及預后的關鍵生化標志物。肌鈣蛋白屬于調節蛋白，分子呈球形，由肌鈣蛋白T(TnT)、肌鈣蛋白I(TnI)、肌鈣蛋白C(TnC)三條肽段組成，其中肌鈣蛋白I(cTnI)屬于一種堿性蛋白，共210個氨基酸，在血清中游離形式只占4.1％，大部分與肌鈣蛋白T及C亞單位結合在一起，以復合體形式存在(Ward DG,Cornes MP,Trayer IP.Structural consequences of cardiac troponin I phosphorylation.J Biol Chem,2002,277(44):41795.)，此外還有可能以氧化型、還原型、磷酸化、去磷酸化及蛋白降解形式釋放(Ward DG,Ashton PR,Trayer HR,et al.Additional PKA phosphorylation sites in human cardiac troponin I.Eur J Biochem,2001,268(1):179.)，屬于心肌損傷高敏感指標性物質，在“微型心肌損傷”中肌鈣蛋白I即可出現陽性結果，因此是臨床上作為心肌細胞損傷的標志性生化檢測項目之一。

由于肌鈣蛋白I(cTnI)在血清中存在的形式多樣，而且衰減周期短，因此對識別肌鈣蛋白I(cTnI)的抗體有很高要求，且不同方法制備的抗體在測定肌鈣蛋白I(cTnI)含量時，所得結果也完全不同，使得臨床上對肌鈣蛋白I(cTnI)含量測定無法標準化(KatrukhaA,BereznikovaA,Filatov V,et al.Biochemical factos influencing measurement ofcardiac troponin I in serum.Clin ChemLab Med,1999,37(11/12):1091.)。

臨床上對肌鈣蛋白I(cTnI)的檢測靈敏度及特異性要求很高，雖然測定肌鈣蛋白I(cTnI)的方法很多，但是定量測定受到許多因素的影響，從而導致各種檢測結果之間相差很大。其中最主要原因是在患者血清中肌鈣蛋白I(cTnI)會有不同程度的降解、游離、復合物形式及不同的清除率，形成肌鈣蛋白I(cTnI)在血清中的不同半衰期，因此各種檢測方法中分別使用針對上述不同抗原決定簇的抗體，其免疫反應必然有很大差異。

目前關于比濁測定法測定肌鈣蛋白I(cTnI)的試劑有很多廠家，但是不管是試劑靈敏度，還是特異性都很難滿足臨床檢測要求，這是因為肌鈣蛋白I(cTnI)在正常人血清中含量極低，在0.08ng/ml以下，而大多比濁法檢測極限在1ng/ml，而且在此檢測極限情況下，影響測定結果的因素也被成倍放大。

發明內容

本發明的目的是設計一組cTnI的微型肽段，將該組微型肽段分別標記于載體酶上(Friguet B,Djavadi-Ohaniance L,Pages J,Bussard A,Goldberg M.A convenient enzyme-linked immunosorbent assay for testing whether monoclonal antibodies recognize the same antigenic site.Application to hybridomas specific for the beta 2-subunit ofEscherichia coli tryptophan synthase.J Immunol Methods,1983Jun 10:60(3):351-8.)，與作用于該組肽段抗體共同組成一個測定樣本cTnI的檢測試劑，該試劑可用于半自動或全自動生化分析儀器準確、特異性的測定血清中心肌肌鈣蛋白I(cTnI)含量。

本發明的技術方案