[發明專利]一種多熒光通道同步顯微成像方法及裝置

有效

• 申請號: 201510452279.1
• 申請日: 2015-07-28
• 公開（公告）號: CN105158220B
• 公開（公告）日: 2018-05-01
• 發明（設計）人: 羅浦文;夏浩涵
• 申請（專利權）人: 上海睿鈺生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司11227
• 代理人: 王寶筠

本申請要求于2015年07月01日提交中國專利局、申請號為201510376530.0、發明名稱為“集成式熒光激發光源裝置”的中國專利申請的優先權，其全部內容通過引用結合在本申請中。

技術領域

本發明涉及熒光顯微成像技術領域，更為具體的說，涉及一種多熒光通道同步顯微成像方法及裝置。

背景技術

參考圖1所示，為現有的一種熒光顯微成像裝置，其包括：一單色熒光激發光源1、與單色熒光激發光源1的照射方向呈45度角設置的二色相鏡2、物鏡3、樣品放置臺4、發射濾光片5和相機6。其中，單色熒光激發光源1發出激發光，經過二色相鏡2反射至物鏡3后，照射至樣品放置臺4的待測樣品板上，而待測樣品板內顆粒受激發發出熒光，通過二色相鏡2和發射濾光片5后，進入相機6成像。

現有的熒光顯微成像裝置一次只能實現一個熒光通道的檢測，當需要多個熒光通道的檢測時，只能在一個熒光通道檢測完成后，切換至另一個熒光通道進行檢測，而后對多個熒光通道的檢測結果進行整合。現今很多熒光染料具有快速的淬滅性，在進行多個熒光通道分步檢測時，由于樣品被反復照射或照射的時間有差異，熒光的淬滅性影響很難測定。因此，若在多熒光通道的檢測過程中，能夠實現多熒光通道同步檢測，即能解決因分步檢測而導致的熒光淬滅性的影響。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種多熒光通道同步顯微成像方法和裝置，實現了多熒光通道同步顯微成像，避免了因分步檢測而導致的熒光淬滅性的影響，便于實驗；而且減少了進入物鏡的單色熒光激發光，使得獲取的熒光圖像更加精確；此外，該裝置結構簡單且成本低。

為實現上述目的，本發明提供的技術方案如下：

一種多熒光通道同步顯微成像方法，將待測樣品板放置完畢后，包括：

根據實驗要求在多個單色熒光激發光源中同時點亮多個不同顏色的單色熒光激發光源的組合為目標光源，其中，每個單色熒光激發光源所發出的單色熒光激發光均傾斜射入所述待測樣品板的預設檢測區域；

在所述待測樣品板背離所述目標光源一側，收集所述預設檢測區域內的顆粒受所述目標光源發出的多色熒光激發光的照射而激發的熒光，并將所述預設檢測區域放大至預設倍數；

對所述預設檢測區域內的顆粒激發的熒光進行多波段濾光處理；

獲取所述預設檢測區域的熒光圖像。

優選的，在點亮所述目標光源后，且在所述目標光源所發出的多色熒光激發光未射入所述待測樣品板之前，還包括：

對所述目標光源中每個單色熒光激發光源所發出的單色熒光激發光進行聚光處理。

相應的，本發明還提供了一種多熒光通道同步顯微成像裝置，包括：

光源裝置、樣品放置臺、物鏡、多波段濾光片和圖像獲取裝置；

所述光源裝置包括：多個單色熒光激發光源和與所述多個單色熒光激發光源電連接的控制系統，其中，所述多個單色熒光激發光源環繞所述物鏡和圖像獲取裝置所構成的成像光路中軸設置，且每個單色熒光激發光源所發出的單色熒光激發光與所述成像光路中軸相交于所述樣品放置臺的預設位置，所述控制系統根據實驗要求在多個單色熒光激發光源中同時點亮多個不同顏色的單色熒光激發光源的組合為目標光源；

所述樣品放置臺設置于所述多個單色熒光激發光源所發出的單色熒光激發光交匯位置，用于放置待測樣品板，且所述待測樣品板的預設檢測區域設置于所述樣品放置臺的預設位置；

所述物鏡設置于所述樣品放置臺背離所述光源裝置一側；

所述多波段濾光片設置于所述物鏡背離所述樣品放置臺一側；

所述圖像獲取裝置設置于所述多波段濾光片背離所述物鏡一側。

優選的，所述光源裝置還包括：

明場光源，所述明場光源所發出的全波段白光朝向所述樣品放置臺、且與所述成像光路中軸重合。

優選的，所述單色熒光激發光源為單色LED熒光激發光源。

優選的，所述光源裝置還包括：

設置于所述單色LED熒光激發光源的照射方向上、且設置于所述單色LED熒光激發光源與所述樣品放置臺之間的激發濾光片。

優選的，所述單色熒光激發光源包括：

白光激發光源；

以及，設置于所述白光激發光源的照射方向上、且設置于所述白光激發光源與所述樣品放置臺之間的激發濾光片。

優選的，所述光源裝置還包括：

設置于所述單色熒光激發光源的照射方向上、且設置于所述單色熒光激發光源與所述樣品放置臺之間的聚光模組。