[發(fā)明專利]一種神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基及利用其進(jìn)行的人神經(jīng)干細(xì)胞體外長(zhǎng)期培養(yǎng)擴(kuò)增方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201510451331.1
• 申請(qǐng)日: 2015-07-28
• 公開（公告）號(hào): CN105062972B
• 公開（公告）日: 2019-04-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳世明;章瑾;宣丹英;王卓然
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江奧瑞健生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0797
• 分類號(hào): C12N5/0797
• 代理公司: 杭州杭誠(chéng)專利事務(wù)所有限公司 33109
• 代理人: 尉偉敏;侯蘭玉

1.一種神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行人神經(jīng)干細(xì)胞體外長(zhǎng)期培養(yǎng)擴(kuò)增方法，其特征在于：采用所述神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)擴(kuò)增，細(xì)胞瓶置于5% CO₂、 37℃溫度培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞增殖情況，每3-4天半量更換神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基一次；

神經(jīng)干細(xì)胞在神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)20-30天，神經(jīng)干細(xì)胞的干細(xì)胞球直徑為500-1000微米時(shí)，把含有干細(xì)胞球的培養(yǎng)基用100-200 ml注射器吸入，經(jīng)干細(xì)胞球切割器切割，干細(xì)胞球切割器為不銹鋼篩網(wǎng)，不銹鋼篩網(wǎng)的孔徑為100μm-320μm；使每1個(gè)神經(jīng)干細(xì)胞球切割成3-8小塊，每塊的直徑為30-200微米，切成小塊的干細(xì)胞團(tuán)放到新培養(yǎng)瓶中，并加入一半新配制的神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基和另一半使用后的神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基互相混合，按1:2或1:4比例分瓶傳代繼續(xù)培養(yǎng)；

該神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)基的組分為：

肝素鈉 200μg，

維生素 E 30 μg，

人重組胰島素 25 mg，

腐胺 1.6 mg，

亞硒酸鈉 6 μg，

人轉(zhuǎn)鐵蛋白 5.5 mg，

黃體酮 7 μg，

L－谷氨酰胺 300mg，

4-羥乙基哌嗪乙磺酸 5.9 g，

人重組表皮生長(zhǎng)因子 20μg，

人重組堿性成纖維生長(zhǎng)因子 20μg，

維生素 C 葡萄糖苷 50 mg，

慶大霉素 40000 IU ，

DMEM/F12 培養(yǎng)基 12 克，

去離子水 1000ml。