[發明專利]一種硫代氧化型輔酶Ⅰ試劑及其應用

有效

• 申請號: 201510450891.5
• 申請日: 2015-07-28
• 公開（公告）號: CN105067541B
• 公開（公告）日: 2018-05-01
• 發明（設計）人: 岳彩琴
• 申請（專利權）人: 中生北控生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及生化檢測領域，具體的，涉及一種硫代氧化型輔酶Ⅰ(Thio-NAD)試劑及其應用。

背景技術

硫代氧化型輔酶Ⅰ(Thio-NAD)，淡黃色或黃色粉末，在很多脫氫酶的作用下，它們可以傳遞作用物分子的氫，生成還原型Thio-NADH，Thio-NADH在400nm左右有特異吸收峰，所以臨床生化領域中，廣泛利用Thio-NAD和Thio-NADH的特點，作為監測生化反應的指標，用來計算被測物的濃度或者活力。例如，在總膽汁酸測定技術中，Thio-NAD可以與3α-HSD一起特異性氧化膽汁酸，生成3-酮類固醇和還原性輔酶(NADH)，體系中有一定量的NADH存在時，又反向生成膽汁酸，每一次循環比原來的反應提高一倍的靈敏度，如此往復循環，從而放大微量的膽汁酸，產生大量的水溶性非染料的硫代還原型輔酶(Thio-NADH)，最后測定生成的Thio-NADH的吸光度變化，測得膽汁酸的含量。此外，Thio-NAD還參與其他的酶循環體系測定樣本中某組份的濃度或活力，如歐洲專利EP2460888A1提供的脫氫酶和脫氫酶底物測定方法和試劑、0477001A2提供的高敏肌醇測定方法、美國專利US8440442B2提供的磷酸測定方法、5266463提供高敏左旋肉堿測定方法和試劑。

由于Thio-NAD溶液會進行氧化還原反應，試劑不穩定，這種特性會影響上述試劑的性能。目前還沒有一種行之有效的方式來保護Thio-NAD的穩定性。

因此有必要設計一種新的、使Thio-NAD保持穩定的復合試劑。

發明內容

本發明的目的在于克服現有的Thio-NAD溶液穩定性差的缺陷，提供一種在2-8℃開蓋使用狀態下和在2-8℃度密閉避光存儲條件下持續穩定的Thio-NAD試劑。

為達到以上目的，本發明提供了一種硫代氧化型輔酶Ⅰ(Thio-NAD)試劑，所述試劑的組成成分包括：

Thio-NAD、緩沖液、表面活性劑和穩定劑所述緩沖液選自由磷酸鹽緩沖液、焦磷酸緩沖液、甘氨酸緩沖液、檸檬酸緩沖液、碳酸鹽緩沖液、醋酸緩沖液、2-N-嗎啡乙磺酸緩沖液、咪唑緩沖液所組成的組中的一種；所述表面活性劑選自由聚氧乙烯十二烷基醚、聚乙二醇對異辛基苯基醚、聚乙二醇單月桂酸酯、4-壬基苯基-聚乙二醇、烷基聚烯烴基乙二醇醚和烷基聚乙烯乙二醇醚中所組成的組中的一種或兩種。

可選的，所述穩定劑選自由NaCl、KCl、MgCl₂和EDTA.2Na和EDTA.2K所組成的組中的一種或多種。

可選的，在所述試劑中，Thio-NAD的濃度為0.01-10mmol/L、緩沖液的終濃度為5-500mmol/L、表面活性劑的濃度按質量體積百分含量(w/v)計為0.05-20％、穩定劑的濃度為0.1-20g/L。

可選的，在所述試劑中，Thio-NAD的濃度為0.5-5mmol/L、緩沖液的終濃度為10-100mmol/L、表面活性劑的濃度按質量體積百分含量(w/v)計為2-10％、穩定劑的濃度為1-10g/L。

可選的，所述試劑的pH為3.0-5.5。

可選的，所述緩沖液為甘氨酸緩沖液和2-N-嗎啡乙磺酸(MES)中的至少一種。

可選的，所述表面活性劑為聚氧乙烯十二烷基醚(EMULGEN109P)和聚乙二醇對異辛基苯基醚(曲拉通TX-100)中的至少一種。

可選的所述穩定劑為MgCl₂和EDTA.2Na中的至少一種。

本發明還提供了所述Thio-NAD試劑的應用。

可選的，所述應用包括制備總膽汁酸測定試劑、酶循環法高敏肌醇測定試劑、酶循環法高敏左旋肉堿測定試劑、酶循環法磷酸測定試劑、酶循環法脫氫酶測定試劑等。

通過上述技術方案，本發明所提供的Thio-NAD在2-8℃開蓋使用狀態下的穩定時間可以達到20-30天。在2-8℃密閉避光存儲過程中的穩定時間可以達到10-15個月。

具體實施方式

下面將通過具體實施方式對本發明進行詳細說明。需要理解的是以下實施例的給出僅是為了起到說明的目的，并不是用于對本發明的范圍進行限制。本領域的技術人員在不背離本發明的宗旨和精神的情況下，可以對本發明進行各種修改和替換。

本發明提供了一種Thio-NAD試劑，所述試劑的組成成分包括：