[發明專利]IFN-γ檢測引物、試劑盒和半定量檢測方法有效
| 申請號： | 201510450656.8 | 申請日： | 2015-07-28 |
| 公開（公告）號： | CN105039549A | 公開（公告）日： | 2015-11-11 |
| 發明（設計）人： | 曾憲卓;魯菲 | 申請（專利權）人： | 深圳愛生再生醫學科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 518057 廣東省深圳市南山區*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | ifn 檢測 引物 試劑盒 定量 方法 | ||
1.一種IFN-γ檢測引物，其特征在于，包括具有序列表SEQ.ID.No.1堿基序列的引物P1、具有序列表SEQ.ID.No.2堿基序列的引物P2。
2.如權利要求1所述的IFN-γ檢測引物，其特征在于，還包括具有序列表SEQ.ID.No.3堿基序列的競爭性引物P3。
3.一種IFN-γ檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求1或2所述的IFN-γ檢測引物。
4.如權利要求3所述的IFN-γ檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括具有序列表SEQ.ID.No.4堿基序列的引物P4、具有序列表SEQ.ID.No.5堿基序列的引物P5。
5.如權利要求3或4所述的IFN-γ檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括RNase抑制劑，且該RNase抑制劑為焦碳酸二乙酯。
6.如權利要求3或4所述的IFN-γ檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括PMA和/或鈣離子載體。
7.一種IFN-γ半定量檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：
獲取IFN-γ對照組細胞和IFN-γ待測組細胞；
提取所述IFN-γ對照組細胞的總RNA，并用具有序列表SEQ.ID.No.1堿基序列的引物P1和具有序列表SEQ.ID.No.3堿基序列的競爭性引物P3進行RT-PCR，得到競爭模板；
提取所述IFN-γ待測組細胞的總RNA，并進行反轉錄獲得待測cDNA模板；
將所述待測cDNA模板和競爭模板混合后，用具有序列表SEQ.ID.No.1堿基序列的引物P1和具有序列表SEQ.ID.No.2堿基序列的引物P2進行PCR，得到靶序列擴增產物。
8.如權利要求8所述的IFN-γ半定量檢測方法，其特征在于，將所述待測cDNA模板和競爭模板混合后，用具有序列表SEQ.ID.No.1堿基序列的引物P1和具有序列表SEQ.ID.No.2堿基序列的引物P2進行PCR步驟之后，還包括：
將所述待測cDNA模板用具有序列表SEQ.ID.No.4堿基序列的引物P4和具有序列表SEQ.ID.No.5堿基序列的引物P5進行RCR，得到對照擴增產物。
9.如權利要求8所述的IFN-γ半定量檢測方法，其特征在于，將所述待測cDNA模板用具有序列表SEQ.ID.No.4堿基序列的引物P4和具有序列表SEQ.ID.No.5堿基序列的引物P5進行RCR步驟之后，還包括：
根據靶序列擴增產物和對照擴增產物計算所述IFN-γ待測組細胞中IFN-γ的mRNA量。
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