[發明專利]一種茅蒼術人工種子制作方法

在審

• 申請號: 201510450002.5
• 申請日: 2015-07-28
• 公開（公告）號: CN104982336A
• 公開（公告）日: 2015-10-21
• 發明（設計）人: 吳沿友;喬韡軼;吳沿勝;邢德科;谷睿智;趙玉國;王金田;劉彩
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 江蘇縱聯律師事務所 32253
• 代理人: 蔡棟

1.一種茅蒼術人工種子的制作方法，其特征在于包括以下步驟：

步驟一：茅蒼術外植體材料的獲取和芽的誘導

選取初秋時節生長成熟的茅蒼術植株，取根莖沖洗干凈后，切取其頂芽、腋芽和不定芽部分，將所述頂芽、腋芽和不定芽部分在超凈工作臺內進行滅菌消毒處理后接種在芽誘導培養基上進行芽誘導培養；

所述芽誘導培養基的成分為：MS培養基+0.2mg/L?NAA+2mg/L?6-BA+2.0％蔗糖+0.7％瓊脂；芽誘導培養基的pH＝5.8；芽誘導培養的條件為：以光強為35μmol·m^-2·s^-1的日光燈光源光照14小時；

所述NAA為α-萘乙酸，6-BA為6-芐氨基腺嘌呤；MS培養基為Murashige和Skooge培養基；

MS培養基的成分包括

大量元素:KNO₃為1900mg/L、NH₄NO₃為1650mg/L、MgSO₄·7H₂O為370mg/L、KH₂PO₄為170mg/L、CaCl₂·2H₂O為440mg/L；

微量元素:MnSO₄·4H₂O為22.3mg/L、ZnSO₄·7H₂O為8.6mg/L、H₃BO₃為6.2mg/L、KI為0.83mg/L、NaMoO₄·4H₂O為0.25mg/L、CuSO₄·5H₂O為0.025mg/L、CoCl₂·6H₂O為0.025mg/L；

鐵鹽溶液:FeSO₄·4H₂O為27.8mg/L、Na₂-EDTA為37.3mg/L；

有機成分:甘氨酸為2.0mg/L、鹽酸硫胺素為0.1mg/L、鹽酸吡哆醇為0.5mg/L、煙酸為0.5mg/L、肌醇為100mg/L；

步驟二：茅蒼術芽的增殖擴繁

待頂芽、腋芽、不定芽部分在芽誘導培養基上誘導出新芽后,將所述新芽再轉接到芽誘導培養基上進行芽蔟誘導培養,待芽增殖擴繁后即形成大量的芽蔟和原球莖；所述芽增殖擴繁的培養條件與所述芽誘導培養的條件相同；

步驟三：茅蒼術人工種子的滴埋制備

在超凈臺內將所述芽蔟和原球莖分割成單芽和單個原球莖，選取適當大小的單芽或原球莖，投入滅菌處理過的包埋液中，攪拌充分混勻；所述包埋液由混合水溶膠包被材料、作水溶膠溶劑的培養基、激素、胚乳養分吸附劑以及碳源組成；

所述混合水溶膠包被材料為質量比為4:1的海藻酸鈉與明膠混合水溶膠；所述包埋液的成分為：溶質總質量的5.0％海藻酸鈉與明膠混合水溶膠+1/2MS培養基+0.7mg/LNAA+3.0％蔗糖+1.0％活性炭，包埋液的pH＝5.8；

用內徑4-6mm的吸管吸取適量包有單芽或原球莖包埋液，滴入到質量濃度為2.0％的CaCl₂溶液中，絡合凝固10分鐘，形成人工種子膠囊，取出所述人工種子膠囊并用濾紙吸干所述人工種子膠囊上的液體，將人工種子膠囊儲藏待萌發，即得茅蒼術人工種子。

2.根據權利要求1所述的一種茅蒼術人工種子的制作方法，其特征在于：所述絡合凝膠的包埋液中的主要成分有以下幾部分

混合水溶膠包被材料：質量配比為海藻酸鈉:明膠＝4:1；總體水溶膠質量為5.0％；

作水溶膠溶劑的培養基：1/2MS培養基，即半強度MS培養基；

激素配伍組合：0.7mg/L?NAA；

胚乳養分吸附劑：1.0％活性炭；

碳源為3.0％蔗糖。