[發(fā)明專利]一種基于比色分析的免疫傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510445183.2
• 申請日: 2015-07-27
• 公開（公告）號: CN105044099A
• 公開（公告）日: 2015-11-11
• 發(fā)明（設計）人: 于思琦;魏琴;任祥
• 申請（專利權）人: 濟南大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及一種比色傳感分析免疫傳感器的制備方法及應用。具體是采用自制ITO傳感平臺構建了一種檢測腫瘤標志物的比色傳感器，屬于新型生物傳感檢測技術領域。

背景技術

甲胎蛋白是一種常見的抗原。在甲胎蛋白的產生過程中，可能伴隨著人體某些器官組織的病變，通常表現(xiàn)為肝癌、胰腺癌、腸胃管腫瘤等等。因此，在臨床研究上，發(fā)展一種快速、簡便、靈敏的檢測甲胎蛋白的方法是十分重要的。

比色分析免疫傳感器具有靈敏度高、可視化檢測、操作簡便、小型化、快速準確檢測分析等優(yōu)點，因此本發(fā)明制備了一種基于顯色復合物的比色傳感器，實現(xiàn)了對甲胎蛋白的檢測。

目前已有的甲胎蛋白的臨床檢測方法很多，如放射免疫分析、化學發(fā)光免疫分析、酶聯(lián)免疫分析等。比色傳感分析是將免疫學方法與可視化比色方法相結合的一種生物傳感器，通過抗原與抗體之間的特性性結合，使得它具有高靈敏性、高選擇性、分析快速和實時監(jiān)測等優(yōu)點。

本發(fā)明采用顯色復合物APTMS-GA為基底材料，利用夾心型的模式構建比色傳感器，二抗標記物為AbAuN-TiO₂GO_x，實現(xiàn)了其對甲胎蛋白的成功固定，增強了傳感器的靈敏度，擴寬了線性范圍，有效地降低了傳感器的檢出限，并可以實現(xiàn)隨時隨地方便檢測。該方法具有靈敏度高、特異性好、檢測快速等優(yōu)點，而且實現(xiàn)了實施檢測，且不需要借助大型儀器，有效降低了傳感器的制作及檢測成本，有效克服了目前甲胎蛋白檢測方法的不足。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的之一是基于顯色復合物APTMS-GA為基底材料，構建了一種可以實時監(jiān)測的比色免疫傳感器。

本發(fā)明的目的之二就是將AuN-TiO₂用于孵化抗體，實現(xiàn)了甲胎蛋白的高靈敏檢測。

本發(fā)明的目的之三就是可以將該比色免疫傳感器用于隨時隨地的實時檢測，達到靈敏監(jiān)測的效果。

本發(fā)明的技術方案如下：

1.一種基于比色分析的免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）用質量分數(shù)為0.1%~10%的3-氨丙基三乙氧基硅烷APTES的甲醇溶液浸泡3mm×3mm的ITO玻璃24h，取出后洗滌；

（2）在ITO玻璃上滴加6μL、3-氨丙基三甲氧基硅烷-戊二醛顯色復合物APTMS-GA，4oC冰箱中晾干；

（3）繼續(xù)滴加6μL、1μg/mL~100μg/mL的甲胎蛋白抗體Ab，4oC冰箱中晾干，超純水沖洗，再于4oC冰箱中晾干；

（4）繼續(xù)滴加6μL、質量分數(shù)為0.1%~2%的BSA溶液，封閉玻璃表面上非特異性活性位點，4oC冰箱中晾干；

（5）繼續(xù)滴加6μL、0.0001ng/mL~50ng/mL的一系列不同濃度的甲胎蛋白抗原標準溶液到ITO玻璃上，超純水沖洗，4oC冰箱中晾干；

（6）繼續(xù)滴加6μL的抗體孵化物AbAuN-TiO₂GO_x溶液，4oC冰箱中晾干，超純水洗滌，4oC冰箱中晾干；

（7）繼續(xù)滴加6μL、1~100mmol/L的葡萄糖溶液，充分反應；

（8）將修飾好的ITO依次放入微孔板中，4oC冰箱中晾干，制得比色免疫傳感器。

2．如權利要求1所述的一種基于比色分析的免疫傳感器的制備方法，所述的抗體孵化物AbAuN-TiO₂GO_x溶液，制備步驟如下：

（1）金納米粒子的制備

取1~3mL、質量分數(shù)為1%的HAuCl₄溶液，用高純水稀釋至100~200mL，磁力攪拌，沸騰后加入1~15mL、質量分數(shù)為1%的檸檬酸鈉，煮沸至酒紅色不再改變，繼續(xù)加熱5min，室溫冷卻，制得金納米粒子；

（2）負載標記物的N-TiO₂材料的制備

向錐形瓶中加入30mL、質量分數(shù)為99.5%的乙醇溶液，繼續(xù)加入0.1~1.0g尿素，攪拌；向試管中加入0.1~2.5g的酞酸丁酯Ti(OBu)₄，430μL、質量分數(shù)為37%的鹽酸；待試管中溶液混合均勻后，將試管中的混合液緩慢加入到尿素溶液中，溶液變成乳白色，攪拌14h；將溶液轉移到反應釜中，130oC條件下加熱1~10h，反應釜冷卻后，將固體用乙醇洗滌，離心2次，在烘箱中干燥4~10h，將干燥后的白色固體用研缽研磨成粉末，放入瓷舟內，在200~600oC灼燒2h，冷卻后得到N-TiO₂材料；