[發(fā)明專利]核酸回收純化試劑盒及方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201510439183.1
• 申請日: 2015-07-23
• 公開（公告）號: CN104975003A
• 公開（公告）日: 2015-10-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 韓繼臣;李勝彬;于丹;徐亞楠
• 申請（專利權(quán)）人: 上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 南京同澤專利事務(wù)所(特殊普通合伙) 32245
• 代理人: 蔣欣;蔣全強

1.一種核酸回收純化試劑盒，其特征在于：包括溶膠液、磁珠液和結(jié)合液；

所述溶膠液中含有濃度為3mol/L～4mol/L異硫氰酸胍和濃度為20mol/L～30mol/L的Tris-Hcl緩沖液，其余為水；

所述磁珠液中含有0.2mg/mL～3mg/mL的羥基磁珠，其余為水；

所述結(jié)合液中含有濃度為40%～60%異丙醇和濃度為1mol/L～2mol/L的氯化鈉，其余為水。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸回收純化試劑盒，其特征在于：所述所述溶膠液中異硫氰酸胍的濃度為3.2mol/L～3.6mol/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸回收純化試劑盒，其特征在于：所述溶膠液中Tris-Hcl緩沖液的濃度為23mol/L～28mol/L，用于配置溶膠液的Tris-Hcl緩沖液的PH值為8。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸回收純化試劑盒，其特征在于：所述結(jié)合液中異丙醇的濃度為45%～55%。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核酸回收純化試劑盒，其特征在于：所述結(jié)合液中氯化鈉的濃度為1.2mol/L～1.8mol/L。

6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的核酸回收純化試劑盒，其特征在于：還包括濃度為75%～95%的乙醇水溶液。

7.一種核酸回收純化方法，其特征在于，用于瓊脂糖凝膠中核酸的回收純化，具體步驟如下：

A．切下含有目的DNA片段的瓊脂塊，放入離心管中；

B．在離心管中加入瓊脂塊體積3倍～6倍的溶膠液，至瓊脂塊完全溶化；所述溶膠液中含有濃度為3mol/L～4mol/L異硫氰酸胍和濃度為20mol/L～30mol/L的Tris-Hcl緩沖液，其余為水；

C．在離心管中加入適量的磁珠液，蓋上離心管，混勻，室溫放置5分鐘以上，再將離心管放到磁力架上，當(dāng)磁珠被吸附在離心管壁上，吸去離心管中液體；所述磁珠液中含有0.2mg/mL～3mg/mL的羥基磁珠，其余為水；

D．在離心管中加入適量的結(jié)合液，混勻，靜置1分鐘以上，再將離心管放到磁力架上，當(dāng)磁珠被吸附在離心管壁上，吸去離心管中液體；所述結(jié)合液中含有濃度為40%～60%異丙醇和濃度為1mol/L～2mol/L的氯化鈉，其余為水；

E．在離心管中加入適量的濃度為75%～95%的乙醇水溶液，混勻，靜置1分鐘以上，再將離心管放到磁力架上，當(dāng)磁珠被吸附在離心管壁上，吸去離心管中液體；

F．重復(fù)步驟E，然后室溫干燥；

G．在離心管中加入TE緩沖液或無菌水，混勻，室溫放置2分鐘以上，再將離心管放到磁力架上，當(dāng)確保磁珠被吸附在離心管壁上，吸取離心管中液體即為目的DNA片段。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的核酸回收純化方法，其特征在于：所述磁珠液的加入量是瓊脂塊體積的0.3倍～0.5倍；所述結(jié)合液的加入量是瓊脂塊體積的3倍～5倍；所述乙醇水溶液的加入量是瓊脂塊體積的4倍～8倍。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的核酸回收純化方法，其特征在于：所述步驟B中，在離心管中加入溶膠液后55℃震蕩2分鐘～5分鐘。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的核酸回收純化方法，其特征在于：所述步驟G中加入的TE緩沖液或無菌水經(jīng)過預(yù)熱為65℃。