[發明專利]毛蕊花苷-金納米顆粒復合物在治療人或動物白血病中的應用

在審

• 申請號: 201510435728.1
• 申請日: 2015-07-22
• 公開（公告）號: CN105056249A
• 公開（公告）日: 2015-11-18
• 發明（設計）人: 袁毅;張亞琴;劉賓;郭志睿;吳友農;張偉
• 申請（專利權）人: 袁毅;南京醫科大學附屬口腔醫院
• 主分類號: A61K47/48
• 分類號: A61K47/48;A61K31/7032;A61P35/02
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

技術領域

本發明涉及生物醫藥領域，毛蕊花苷-金納米顆粒復合物在治療人或動物白血病中的應用。

背景技術

癌癥是惡性腫瘤的統稱。白血病是一種預后較差，死亡率較高的惡性腫瘤疾病，其嚴重危害人類健康和生命，曾被稱為不治之癥。急性白血病是病情非常兇險的一種疾病，患急性白血病患者若不經特殊治療，其生存時間最多只有三個月，若該患者受到感染，或者是顱內出血，必死無疑。白血病治療的一個重要手段是化療，大部分病人往往會因白血病細胞的多藥耐藥而導致化療無效或逐漸由有效轉為無效。

金納米顆粒(goldnanoparticle,Au)因其獨特的結構、催化性能等優點在大多領域得到了廣泛應用，在過去的十年，Au已在臨床診斷和治療癌癥過程中得到了廣泛應用，并且隨著納米技術的不斷發展，作為一種有效、安全的藥物載體，Au在癌癥治療領域獲得越來越多的關注。

《毛蕊花苷對MPP+誘導的SHSY5Y細胞凋亡的保護作用》中雖然公開了毛蕊花苷(Verbascoside,VB)能抑制MPP+誘導的SHSY5Y細胞凋亡，并且VB對神經細胞的保護作用可能與其降低細胞內活性氧水平，維持線粒體膜電位的高能狀態和抑制Caspase-3的活性有關。然而，上述發明所指向的病癥是帕金森病，并沒有提及VB對腫瘤細胞特別是人白血病細胞K562的作用。本領域技術人員并不清楚VB是否具有促進腫瘤細胞凋亡進而達到抑制腫瘤生長的作用。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供毛蕊花苷-金納米顆粒復合物(VB-Au)在治療人或動物白血病中的應用。

本發明的目的可以通過以下技術方案實現：

VB-Au在制備治療人或動物白血病的藥物中的應用；優選VB-Au在制備誘導人白血病細胞K562凋亡的藥物中的應用。

本發明所述的應用，優選將VB包被Au制備成VB-Au復合物使用。本發明所述的VB-Au復合物可通過現有技術制備。

有益效果：

實驗研究表明，同正常對照組(NC)相比，VB或VB-Au復合物均能促使人白血病K562細胞在體內外發生凋亡，但同VB處理組相比，VB-Au在體內外促使人白血病K562細胞發生凋亡的作用更加顯著，加之VB-Au復合物成本低、易合成、毒副作用小等，因此VB-Au復合物有望用于制備治療人或動物白血病藥物。

附圖說明

圖1顯示運用電鏡鑒定合成的VB-Au復合物。A和C：Au納米顆粒的掃描電鏡圖(A)和透射電鏡圖(C)；B和D：VB-Au的掃描電鏡圖(B)和透射電鏡圖(D)。

圖2顯示電鏡觀察K562細胞經VB-Au處理48h后，細胞核凝縮及核碎裂情況。A和C：未經處理的K562細胞的透射電鏡圖(A)和掃描電鏡圖(C)；B和D：經VB-Au處理的K562細胞的透射電鏡圖(B)和掃描電鏡圖(D)。

圖3顯示經VB-Au處理后K562細胞的凋亡狀況。A：未經處理的K562細胞；B，C和D：經VB-Au處理24h(B)，48h(C)及72h(D)后，凋亡的K562細胞量不斷增加。

圖4顯示經Au，VB及VB-Au分別處理K562細胞72h后，MTT檢測各組細胞的細胞活力。結果顯示，同未經處理的細胞(NC)相比，VB及VB-Au都可明顯抑制細胞的活力，而VB-Au抑制細胞活力的作用比VB更顯著。

圖5顯示經Au，VB及VB-Au分別處理K562細胞72h后，流式細胞術檢測各組細胞的凋亡。圖6為對圖5細胞凋亡的定量分析。同樣發現，同未經處理的細胞(NC)相比，VB及VB-Au都可顯著誘導細胞的凋亡，而VB-Au促使細胞凋亡的作用比VB更顯著。

圖7顯示進一步運用吖啶橙/溴化乙錠染色(AO/EB染色)分析經VB-Au處理的K562細胞的凋亡情況。A和B：K562細胞經VB-Au復合物處理24h前(A)、后(B)的早期凋亡圖；C和D：K562細胞經VB-Au復合物處理72h前(C)、后(D)的晚期凋亡圖。

圖8顯示K562細胞經不同組處理后發生凋亡的DNA片段分析圖。A：為各組處理24h后的結果；B：為各組處理細胞48h后的結果；C：為各組處理72h后的結果；D：為各組處理0h的圖片。其中，泳道1為正常對照組，泳道2為經VB單獨處理組，泳道3為經VB-Au復合物處理組。結果顯示，VB和VB-Au都可時間依賴性的誘導細胞發生凋亡，然而，同VB處理組相比，VB-Au誘導細胞凋亡的作用更加顯著。