[發明專利]重組雞白痢沙門菌、制備方法及應用

有效

• 申請號: 201510425141.2
• 申請日: 2015-07-17
• 公開（公告）號: CN105154377B
• 公開（公告）日: 2020-02-11
• 發明（設計）人: 郁川;程相朝;余祖華;翟崇凱;何雷;賈艷艷;廖成水;李靜;汪洋;張春杰;李銀聚;吳庭才
• 申請（專利權）人: 河南科技大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;A61K39/295;A61K39/17;A61K39/112;A61P31/04;A61P31/14;C12R1/42
• 代理公司: 41119 鄭州睿信知識產權代理有限公司
• 代理人: 牛愛周

本發明公開了一種重組雞白痢沙門菌、制備方法及應用，屬于動物細菌基因工程技術領域。重組雞白痢沙門菌的名稱為雞白痢沙門菌C79?13ΔcrpΔasd(pYA3493?HN)，保藏編號：CCTCC NO:M 2015305，其表達的雞新城疫病毒保護性抗原基因?HN基因是雞新城疫病毒重要的免疫原性基因片段，具有良好的免疫保護性。重組菌株衍生于雞白痢沙門菌標準菌株C79?13，完全保留了C79?13針對雞白痢沙門菌的免疫效力，且其毒力比C79?13更弱，具有良好的生物安全性，可同時提供針對雞白痢沙門菌和雞新城疫兩種病原的保護力。同時，該重組菌株不含抗性標記，完全符合疫苗生物安全性要求。

技術領域

本發明涉及一種重組雞白痢沙門菌，具體涉及一種不含抗性標記的表達雞新城疫病毒主要保護性抗原的減毒雞白痢沙門菌，以及該重組雞白痢沙門菌的制備方法和應用，屬于動物細菌基因工程技術領域。

背景技術

沙門菌(Salmonella)是一種胞內寄生的革蘭氏陰性腸道桿菌，具有侵襲性。最常見的沙門菌屬有鼠傷寒沙門菌、豬霍亂沙門菌、腸炎沙門菌和雞白痢沙門菌等。沙門菌對人和動物均有較強的致病力，可引起人體和動物的胃腸道疾病，沙門菌在外界環境中的生存力較強，在利用基因工程的方法致弱后，仍具有較強的侵襲力。

最初預防沙門菌的疫苗為全菌體滅活苗，但該類疫苗只能激發機體的體液免疫，且容易引起副作用，此外，還存在需多次免疫及無交叉保護等不足之處，因而不能廣泛應用。此后，該領域眾多學者模擬沙門菌腸道自然感染的方式，給動物口服減毒沙門菌，結果發現，可誘導機體產生更好的體液免疫和細胞免疫，因此該方法受到眾多學者的普遍重視(Li,Q.,Hu,Y.,Xu,Y.,et al..2014.A gene knock-in method used to purify plasmidpSPI12from Salmonella enterica serovar Pullorum and characterization ofIpaJ.J Microbiol Methods,98,128-133.)。

由于腸炎傷寒沙門菌Ty21a及豬霍亂沙門菌疫苗菌株C500的致弱背景不清晰，各國研究者們嘗試應用基因工程的方法，研究遺傳背景清晰的傷寒減毒基因缺失疫苗株，用于口服免疫研究，例如cya/crp缺失株(Curtiss R,Goldschmidt RM,Fletchall NB,etal.1988.Avirulent Salmonella typhimurium delta cya delta crp oral vaccinestrains expressing a streptococcal colonization and virulence antigen,Vaccine,6(2):155-60.)、asd基因缺失株(Galán J E,Nakayama K,Curtiss IIIR.Cloning and characterization of theΔasd gene of Salmonella typhimurium:usein stable maintenance of recombinant plasmids in Salmonella vaccine strains[J].Gene,1990,94(1):29-35.)等。

減毒沙門菌除本身可作為疫苗外，也可作為載體來表達外源抗原基因。近年來，以減毒沙門菌為載體表達腫瘤、病毒、細菌、寄生蟲等的外源保護性抗原基因，研制多聯基因工程疫苗已成為該領域的研究熱點，為研制新型基因工程疫苗開辟了新的途徑(李正,程相朝.減毒沙門氏菌在疫苗和疫苗載體方面的研究進展[J].中國畜牧獸醫，2012,01:40-44)。

以減毒沙門菌為載體的基因工程疫苗的優越性主要表現在(胡嬌.豬霍亂沙門菌C500Δasd缺失株的構建及其作為疫苗活載體的初步應用[D].揚州大學,2010；Xu,F.,Ulmer,J.B.2003.Attenuated salmonella and Shigella as carriers for DNAvaccines.J Drug Target,11(8-10):481-488.)：