[發明專利]一種健骨藥物的質量檢測方法有效
| 申請號： | 201510419150.0 | 申請日： | 2015-07-16 |
| 公開（公告）號： | CN105021729B | 公開（公告）日： | 2017-04-26 |
| 發明（設計）人： | 陶玉 | 申請（專利權）人： | 金花企業(集團)股份有限公司西安金花制藥廠 |
| 主分類號： | G01N30/02 | 分類號： | G01N30/02;G01N21/31 |
| 代理公司： | 西安通大專利代理有限責任公司61200 | 代理人： | 王霞 |
| 地址： | 710065 陜西*** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 藥物 質量 檢測 方法 | ||
1.一種健骨藥物的檢測方法，其特征在于，該健骨藥物由人工虎骨粉和輔料制成膠囊，其質量檢測方法包括以下測定步驟：
1)將健骨藥物水解后，測定樣品中總氨基酸含量，具體選擇以下任意一種測定方法：
a.采用微波水解、自動在線衍生，使用全自動氨基酸分析儀測定每粒膠囊中包含羥脯氨酸的總氨基酸含量，具體包括以下步驟：
(1)對照品溶液的制備：精密稱取氨基酸對照品：L-羥脯氨酸、脯氨酸，門冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、甘氨酸、組氨酸、精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、酪氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸及賴氨酸，加濃度為0.02mol/L鹽酸溶液配成對照品溶液，具體配制關系如下：
(2)供試品溶液的制備：精密稱定膠囊中的內容物人工虎骨粉0.2g，置高通量微波消解管中，精密加入10mL濃度為6mol/L的鹽酸溶液，稱定重量，置微波消解儀內于180℃水解15min，放冷至室溫，用6mol/L的鹽酸溶液補足減失的重量，加入10mL濃度為6mol/L的氫氧化鈉溶液中和，并轉移至100mL容量瓶中，用濃度為0.02mol/L的鹽酸溶液稀釋并定容至刻度；精密量取5mL置于25mL容量瓶中，用濃度為0.02mol/L的鹽酸溶液稀釋并定容至刻度，濾過，制得供試品溶液；
(3)總氨基酸的測定：分別精密量取制備的對照品溶液及供試品溶液各20μL，并分別注入氨基酸分析儀，測得所述健骨藥物每粒膠囊中包含羥脯氨酸的總氨基酸含量；
b.采用傳統水解、PITC衍生法，用高效液相色譜法測定每粒膠囊中包含羥脯氨酸的總氨基酸含量，具體包括以下步驟：
(1)對照品溶液的制備：精密稱取氨基酸對照品：門冬氨酸、谷氨酸、羥脯氨酸、絲氨酸、甘氨酸、組氨酸、精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸及鹽酸賴氨酸，加濃度0.1mol/L鹽酸溶液配成對照品溶液，具體配制關系如下：
(2)供試品溶液的制備：精密稱定膠囊內容物人工虎骨粉0.2g，置耐壓管中，精密加入6mL濃度為6mol/L的鹽酸溶液，在110℃水解24小時，冷卻至室溫，氮吹干燥，精密加入0.1N氫氧化鈉溶液20mL，以2500轉/分鐘，離心5min；然后精密量取5mL上清液，并用0.1N鹽酸溶液稀釋并定容至刻度；精密量取5mL置于10mL容量瓶中，用0.1N的鹽酸溶液稀釋并定容至刻度，濾過，制得供試品溶液；
(3)對照品溶液及供試品溶液的衍生：分別精密量取制得的對照品溶液及供試品溶液各4mL，分別置于20mL具塞試管中，并均加入0.1mol/L異硫氰酸苯酯乙腈溶液2mL、1mol/L三乙胺乙腈溶液1mL，搖勻，室溫下反應1小時后，加入8mL正己烷萃取；靜置10分鐘，取下層溶液并用0.45um有機濾膜過濾，取濾液，得到衍生后的對照品溶液和衍生后的供試品溶液；
(4)測定：分別精密量取上述衍生后的對照品溶液及供試品溶液各2μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖；以外標法計算樣品中包含羥脯氨酸的總氨基酸含量；
液相色譜條件為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Shim-packVP-ODS4.6mm×250mm；以0.1mol/L醋酸鈉緩沖溶液為流動相A，以甲醇：乙腈：水＝20:60:20的混合液為流動相B；檢測波長為254nm，柱溫為35℃，進樣體積為2μL，洗脫條件如下：
c.采用傳統水解、自動在線衍生，使用全自動氨基酸分析儀測定每粒膠囊中包含羥脯氨酸的總氨基酸含量，具體包括以下步驟：
(1)對照品溶液的制備：精密稱取L-羥脯氨酸、脯氨酸，門冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、甘氨酸、組氨酸、精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、酪氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸對照品適量，加0.02mol/L鹽酸溶液配成對照品溶液，具體配制關系如下：
(2)供試品溶液的制備：精密稱定膠囊中內容物人工虎骨粉0.2g，置耐壓管中，精密加入6mol/L的鹽酸溶液10mL，稱定重量，置110℃水解24小時，放冷至室溫，用6mol/L的鹽酸溶液補足減失的重量，加入6mol/L的氫氧化鈉溶液10mL中和，并轉移至100mL容量瓶中，用0.02mol/L的鹽酸溶液稀釋并定容至刻度；精密量取5mL，置25mL容量瓶中，用0.02mol/L的鹽酸溶液稀釋并定容至刻度，濾過，制得供試品溶液；
(3)總氨基酸的測定：分別精密量取上述對照品溶液及供試品溶液各20μl，分別注入氨基酸分析儀，測得所述健骨藥物每粒膠囊中包含羥脯氨酸的總氨基酸含量；
d.采用微波水解、PITC手動衍生，用高效液相色譜法測定每粒膠囊中包含羥脯氨酸的總氨基酸含量，包括以下步驟：
(1)對照品溶液的制備：精密稱取氨基酸對照品：門冬氨酸、谷氨酸、羥脯氨酸、絲氨酸、甘氨酸、組氨酸、精氨酸、蘇氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、鹽酸賴氨酸，加0.1mol/L鹽酸溶液配成對照品溶液，具體配制關系如下：
(2)供試品溶液的制備：精密稱定膠囊內容物人工虎骨粉0.2g，置高通量微波消解管中，精密加入6mol/L的鹽酸溶液6mL，稱定重量，置微波消解儀內于180℃水解15min，放冷至室溫，氮吹干燥，精密加入0.1N氫氧化鈉溶液20mL，以2500轉/分鐘，離心5min；精密量取上清液5mL，用0.1N鹽酸溶液稀釋并定容至刻度；精密量取5mL，置10mL容量瓶中，用0.02N的鹽酸溶液稀釋并定容至刻度，濾過，制得供試品溶液；
(3)對照品溶液及供試品溶液的衍生：分別精密量取上述對照品溶液及供試品溶液各4mL，分別置于20mL具塞試管中，并均加入0.1mol/L異硫氰酸苯酯乙腈溶液2mL，1mol/L三乙胺乙腈溶液1mL，搖勻，室溫下反應1小時后，加入8ml正己烷萃取；靜置10分鐘，取下層溶液用0.45um有機濾膜過濾，取續濾液，得到衍生后的對照品溶液和衍生后的供試品溶液；
(4)測定：分別精密量取上述衍生后的對照品溶液及供試品溶液各2μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖；以外標法計算樣品中包含羥脯氨酸的總氨基酸含量；
液相色譜條件：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Shim-pack VP-ODS4.6mm×250mm；以0.1mol/L醋酸鈉緩沖溶液為流動相A，以甲醇：乙腈：水＝20:60:20的混合液為流動相B；檢測波長為254nm，柱溫為35℃，進樣體積為2μL；
2)采用原子吸收分光光度法測定該健骨藥物中總鈣含量，具體包括以下步驟：
(1)標準曲線的制備：選取100μg/mL鈣單元素標準溶液，精密量取0、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL，分別置于50mL量瓶中，并加氧化鑭試液2mL，加超純水稀釋并定容至刻度，搖勻，即得；
(2)供試品溶液的制備：精密稱定本品內容物人工虎骨粉0.2g，置高通量微波消解管中加硝酸5mL、過氧化氫1mL，于180℃消解15min，用水轉移并定容至100mL容量瓶中；精密量取1mL置于50mL量瓶中，加氧化鑭試液2mL，加超純水稀釋并定容至刻度，搖勻，即得；
以相同方法制備試樣空白對照品溶液；
(3)測定：取空白對照品溶液及供試品溶液，照原子吸收分光光度法，在422.7nm波長處測定吸光度，計算得到健骨藥物每粒膠囊中總鈣含量。
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