[發明專利]微生物絮凝劑協同活性炭固定絮凝沉降油脂酵母的方法

有效

• 申請號: 201510414320.6
• 申請日: 2015-07-15
• 公開（公告）號: CN105063005B
• 公開（公告）日: 2018-03-30
• 發明（設計）人: 喬楠;樊雪;于大禹;施云芬;張曉君;王磊;魏群;宋煜
• 申請（專利權）人: 東北電力大學
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12R1/85
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司22100
• 代理人: 白冬冬

技術領域

本發明屬于微生物技術領域。

背景技術

隨著石油資源的日益緊缺，多渠道開發可再生油脂資源成為必然。微生物油脂又稱單細胞油脂，是由酵母、霉菌、細菌和藻類等微生物在一定的條件下， 利用碳水化合物、碳氫化合物和普通油脂作為碳源，在菌體內產生的大量油脂。利用微生物生產油脂，微生物細胞增殖快，生產周期短；微生物生長所需的原料豐富，價格便宜；用微生物方法生產油脂，不受季節、氣候變化的限制，能連續大規模生產，生產成本低。斯達氏油脂酵母能在細胞內合成大量的油脂，是一種高效的產油微生物。工業上常用斯達氏油脂酵母進行微生物油脂的制備。

然而目前微生物油脂制備上的主要瓶頸就是工業生產中產油微生物菌體積累油脂后從發酵液中分離、獲得的工藝復雜，成本高。

發明內容

本發明的目的是對活性炭進行處理后成為載體，用于固定斯達氏油脂酵母，便于后續微生物絮凝劑對其進行絮凝沉降的微生物絮凝劑協同活性炭固定絮凝沉降油脂酵母的方法。

本發明的步驟是：

(1)活性炭的處理

取活性炭，在200℃下干燥2 h；冷卻至室溫后，按活性炭和水的體積比為1:3稱取活性炭和水；將活性炭和水攪拌均勻后，加入濃度為38%硫酸；水浴溫度80℃條件下充分攪拌2 h；之后抽濾，用除鹽水對活性炭進行多次洗滌，至濾液pH值呈中性；將過濾后的活性炭在200℃下烘干；取出活性炭置于300℃馬弗爐中烘烤2.5 h后置于干燥器中備用；

(2) 醬油曲霉制備微生物絮凝劑

將保存在斜面上的菌株編號為CGMCC NO：3.5231的醬油曲霉接入到無菌的發酵培養基中，所述的醬油曲霉發酵培養基中各組分用量分別為：葡萄糖；NaNO₃；MgSO₄·7H₂O；KCl；FeSO₄；KH₂PO₄；pH=6.0；在30℃搖床上以180 rpm培養3天，得到高絮凝活性的微生物絮凝劑；冷卻至室溫后，將微生物絮凝劑存放在4℃冰箱中保存備用；

(3) 斯達氏油脂酵母培養液的制備

將保存在斜面上的菌株編號為CGMCC NO：2.1560的斯達氏油脂酵母接入到無菌的種子培養基中，所述的斯達氏油脂酵母種子培養基中各組分用量分別為：葡萄糖；（NH₄）₂SO₄；酵母粉；KH₂PO₄；MgSO₄·7H₂O；pH=6.0；在22℃搖床上以150 rpm培養1天，得到培養好的斯達氏油脂酵母菌懸液，將得到的菌懸液存放在4℃冰箱中保存備用；

(4) 活性炭對菌株編號為CGMCC NO：2.1560的斯達氏油脂酵母的固定化

取步驟（3）得到的斯達氏油脂酵母菌懸液，投入到無菌的限氮培養基中，所述的限氮培養基中各組分用量分別為：葡萄糖；（NH₄）₂SO₄；酵母粉；KH₂PO₄；MgSO₄·7H₂O；pH=6.5；取步驟（1）得到的活性炭，加入到上述已經接入斯達氏油脂酵母的限氮培養基中，在22℃搖床上以150 rpm培養3天，得到活性炭固定化的斯達氏油脂酵母菌懸液；

(5) 微生物絮凝劑絮凝沉降活性炭固定化的菌株編號為CGMCC NO：2.1560的斯達氏油脂酵母，取步驟（2）得到的微生物絮凝劑，投入到步驟（4）得到的活性炭固定化的斯達氏油脂酵母菌懸液中，用混凝攪拌器以300 rpm快速攪拌1 min，然后以30 rpm慢速攪拌3 min，然后靜置5 min，靜置時每隔1 min取上清液，用分光光度計在 600 nm 處測定其吸光度，計算絮凝沉降率，實現微生物絮凝劑絮凝沉降活性炭固定化的斯達氏油脂酵母。

本發明對活性炭進行處理，使其成為固定化油脂酵母的優良載體，進而用于固定斯達氏油脂酵母，增大斯達氏油脂酵母的粒徑，便于后續微生物絮凝劑對其進行絮凝沉降；然后利用醬油曲霉制備微生物絮凝劑；最后利用醬油曲霉制備的微生物絮凝劑對活性炭固定化的斯達氏油脂酵母進行絮凝沉降，使斯達氏油脂酵母從發酵液中分離出來。其積極效果是：

1、微生物絮凝劑和活性炭無毒無害，對微生物油脂的后續利用不產生影響；