[發明專利]偶聯重組Pro-A和/或G多糖親和介質及其應用

在審

• 申請號: 201510412874.2
• 申請日: 2015-07-14
• 公開（公告）號: CN105017414A
• 公開（公告）日: 2015-11-04
• 發明（設計）人: 鄭文云;陳蕭蕭;何秀娟;馬興元
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K1/14
• 代理公司: 上海翼勝專利商標事務所(普通合伙) 31218
• 代理人: 翟羽

技術領域

本發明屬于生物材料領域，更具體地講，涉及新一代偶聯重組Pro-A和/或G多糖親和介質及其應用。

背景技術

Kohler和Milstein于1975年發明了被稱之為“魔彈”的單抗技術，并在1984年獲得了諾貝爾獎。單抗是由B淋巴細胞和骨髓瘤細胞雜交形成的雜交瘤細胞產生，其重鏈和輕鏈所形成的結構域可以識別和結合特異性抗原。1987年單抗技術被成功應用到診斷試劑當中，但由于HAMA(人抗鼠抗體)反應，沒能有效應用在人類疾病的治療上。90年代，隨著基因工程技術的迅速發展，治療性單抗從早期100％的鼠源性單抗(Mab)，到嵌合抗體，人源化抗體(Humanized?Mab)，到近年的全人源性抗體，逐步消除了抗體的免疫源性問題，在保持對抗原高親和力的同時，改善了抗體的藥動力學。1997年FDA批準第一個治療淋巴癌的嵌合單抗藥物Rituxan,抗CD-20單抗上市，并進入56個國家，由IDEC/Genentech/Roche三大藥廠聯合生產，至今仍然供不應求。抗體藥物的主要治療機制是：(1)直接誘導癌細胞凋亡或抑制癌細胞生長和代謝，或通過補體效應或ADCC(抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用)間接殺死癌細胞。(2)癌癥、心血管等疾病的導向治療：以單抗荷載同位素、毒素蛋白、抗生素等藥物制成生物導彈。(3)應用抗T細胞、抗IL-2R的單抗防治器官移植排斥反應等。(4)以單抗制成避孕、傳染病的預防藥物。

1986-2014年美國FDA審批的抗體藥物為48個，占全部生物藥物的38.40％，由此可見抗體藥物逐漸成為生物藥物的主宰。二十世紀八十年代末，抗體藥物僅占生物藥物的10％；進入九十年代后隨著抗體技術的迅速發展抗體藥物在腫瘤、消化、免疫、呼吸、泌尿、骨骼肌疾病、疾病診斷等不同領域廣泛應用。2014抗體藥物已經占到2014年審批生物藥物的55％。已上市的抗體有不少已成為年銷售額數億美元的“重磅炸彈藥物”(Blockbuster?Drug)。全球抗體藥物的市場增長十分迅猛，有約200多種單抗在臨床實驗，占整個臨床生物技術藥品總數的三分之一多，其中四分之一在臨床三期或等候批準。抗體的銷售額也在逐年提高，僅2013年北美處方藥銷售前100位中有10個是單克隆抗體藥物。2000年人類基因組測序完成，近年蛋白質組和結構基因組技術的蓬勃發展，也給抗體研究帶來更多機遇和挑戰。國內正在推動的抗原表位組學、抗體組學和抗體藥物組學，將對中國抗體技術的發展起到很大的促進作用。

目前抗體分離方法很多，主要有硫酸銨沉淀法，辛酸沉淀法，DEAE離子交換層析法，羥基磷灰石層析法，凝膠層析法，以及上述方法相結合的聯合分離方法以及Protein?A親和層析法，Protein?G親和層析法，抗原親和層析法和抗抗體親和層析法。在這些方法中，rProtein?A和Protein?G相結合的Protein?A/G親和層析是分離、純化高效價、高純度的抗體較好的方法之一。其中的Protein?A，即A蛋白是金黃色葡萄球菌的表面蛋白，分子量為42KD，有5個不同的IgG結合位點，不同的位點獨立地與抗體結合Fc片段特異性結合。但IgA，IgM，IgE也可能結合在protein?A上，當達到飽和時，一個A蛋白分子至少可以結合兩個IgG分子。A?蛋白對IgG有高親和力和特異性，這一特點使之非常適合用于純化腹水或細胞培養上清中的單克隆抗體。Protein?G，即G蛋白是一種源自鏈球菌G族的細胞表面蛋白，一種三型Fc受體。其通過類似于A蛋白的非免疫機制與抗體的Fc段結合。像A蛋白一樣，G蛋白與IgG的Fc區域特異性結合，不同的是，Protein?G?Sepharose還可以特異性低親和地與重鏈的CH1及輕鏈的C_k結合而用于純化Fab及F(ab’)2。另外，ProteinG可以廣泛、更強地結合許多類型的IgG，多克隆IgG及人IgG，同時血清蛋白結合水平更低，純度更高，配體脫落也相對更低。