[發明專利]具有延長體內半衰期的ADAMTS13-MDTCS融合蛋白及其應用

有效

• 申請號: 201510412609.4
• 申請日: 2015-07-13
• 公開（公告）號: CN104926946B
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 于代冠;朱澤堯;吳朝霞;張炳文;米奇·托特雷拉
• 申請（專利權）人: 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K14/765;C12N9/88;C12N15/62;A61K38/51;A61K47/64;A61P7/02
• 代理公司: 北京市萬慧達律師事務所 11111
• 代理人: 楊洋;謝敏楠

本發明屬于醫藥生物工程技術領域，公開了一種人血管性血友病因子裂解酶的突變體ADAMTS₁₃?MDTCS融合蛋白及其在制備治療血栓性血小板減少性紫癜(TTP)藥物中的應用，本發明通過連接肽，將ADAMTS₁₃?MDTCS與人血清白蛋白結合，形成融合蛋白，此融合蛋白保證了原有蛋白ADAMTS₁₃?MDTCS的生物學活性，又顯著增加了ADAMTS₁₃?MDTCS蛋白的半衰期，克服了現有ADAMTS₁₃?MDTCS降解的問題，具備長效生物學活性，其蛋白表達量高，可用于工業化生產。

技術領域

本發明涉及醫藥生物工程技術領域，具體涉及一種血管性血友病因子裂解酶的突變體ADAMTS13-MDTCS與人血清白蛋白HSA的融合蛋白、制備方法及其在制備治療血栓性血小板減少性紫癜(TTP)藥物中的應用。

背景技術

1.1血栓性血小板減少性紫癜

血栓性血小板減少性紫癜(thrombotic thrombocytopenic purpura,TTP)是一種微血管血栓出血綜合征，是因為血小板大量消耗而減少，在血液微循環中形成了血小板血栓，臨床特征表現為在皮膚表面形成紫癜。微血管溶血性貧血和血小板減少是本疾病最核心的兩大特征，另外或伴有神經系統損傷、腎臟損害及發熱表現。臨床上TTP分先天性TTP(基因突變)和獲得性TTP(產生自身抗體)。TTP臨床表現預后差，病程短，死亡率高，達80％～90％，TTP緩解后復發率較高，為30％～60％。在TTP臨床治療方面，目前尚無特效藥，治療通常采用血漿置換療法或全血置換療法，此類治療方法費用高昂，過程復雜，且副作用較多，臨床上存在交叉感染等諸多風險。因此，TTP的新型藥物的研發成為治療本病的關鍵。

1.2ADAMTS13與TTP

血管性血友病因子裂解酶(A Disintegrin And Metalloprotease withThrombospondin type Repeats 13,ADAMTS13)是ADAMTS家族的成員之一，屬于金屬蛋白酶。ADAMTS13基因位于9號染色體長臂(9q34)，cDNA全長4597kb，由29個外顯子組成，開放閱讀框為4284bp，編碼1427個氨基酸。ADAMTS13蛋白由肝臟內皮細胞合成并分泌到血液中，其主要功能是剪切在新生的富血小板血栓內的血管性血友病因子(VWF因子)，以防止溶血、血小板減少和組織梗塞。該酶在正常機體內可以特異性地裂解VWF-A2區的Tyr1605-Met1606之間的肽鍵，從而使VWF裂解，保持正常的止血和血循環功能。當ADAMTS13缺乏或活性減低時，不能夠有效的裂解VWF與血小板糖蛋白結合形成的超大分子量VWF(UL-VWF)分子時，便使之形成富含血小板和VWF的血栓，導致TTP的發生。由于發現TTP發病與ADAMTS13蛋白酶的功能缺失密切相關，因此ADAMTS13重組蛋白成為治療TTP疾病的新的研究方向。目前，體外表達ADAMTS13基因，獲得功能性的ADAMTS13重組蛋白，仍處于實驗研究階段。

1.3ADAMTS13全長蛋白(ADAMTS13-FL)與ADAMST13截斷型突變體(ADAMTS13-MDTCS)

ADAMTS13作為ADAMTS家族一員，ADAMTS13-FL包含以下公共結構域，分別是信號肽(signal sequence,SP)，前導肽(propeptide,P)，金屬蛋白酶結構域(metalloproteasedomain,M)，去整合素樣結構域(disintegrin-like domain,D)，I型血小板反應蛋白重復序列(thrombospondin type1,TSP1)，富含半胱氨酸結構域(cysteine-rich domain,C)，空間結構域(spacer domain,S)，空間結構域后面是7個TSP1重復序列，和ADAMTS13特有的2個CUB結構域。