[發明專利]一株產木聚糖酶的芽孢桿菌及其應用和篩選方法

有效

• 申請號: 201510412437.0
• 申請日: 2015-07-14
• 公開（公告）號: CN105039215B
• 公開（公告）日: 2018-03-06
• 發明（設計）人: 唐建
• 申請（專利權）人: 湖南龍騰生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/42;C12R1/07
• 代理公司: 北京風雅頌專利代理有限公司11403
• 代理人: 王安娜,李翔

技術領域

本發明涉及微生物及其應用領域，特別是涉及一株產木聚糖酶的芽孢桿菌及其應用和篩選方法。

背景技術

木聚糖酶(1,4-β-D-xylanase；EC 3.2.1.8)是一種重要的工業用酶，在造紙工業、食品、飼料和能源等領域中具有重要的應用價值。木聚糖酶在造紙工業上可作為紙漿漂白助劑，可以提高紙張的白度和強度，減少傳統氯化物漂白劑的實用；在動物飼料中添加木聚糖酶，可以降解木聚糖，提高動物對飼料的利用率；在食品工業上，木聚糖酶還可以用于澄清果汁飲料，改良面包松軟度。利用木聚糖酶降解木聚糖還可以得到低聚木糖，低聚木糖可以促進人體大腸中益生菌的增殖，改善腸道功能。自然界中，不同來源的木聚糖酶的酶活特性有很大的差異，有著各自特異的最適反應pH和最適作用溫度。但是，多數木聚糖酶最適反應pH值在4.0～6.0，較窄的最適反應pH限制了木聚糖酶在工業上的應用。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提出一株產木聚糖酶的芽孢桿菌及其應用和篩選方法，以克服現有技術中存在的問題。

基于上述目的，本發明提供的產木聚糖酶的芽孢桿菌Bacillus sp.LUX8保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏地點為中國.武漢.武漢大學，保藏登記入冊的編號為CCTCC NO:2015308，保藏日期為2015年5月17日。

在本發明的一些實施例中，所述菌株發酵生產的木聚糖酶的酶解溫度為30～50℃。

在本發明的一些實施例中，所述菌株發酵生產的木聚糖酶的酶解pH為5.0～9.0。

本發明還提供上述產木聚糖酶的芽孢桿菌的應用，將所述芽孢桿菌發酵，收集發酵產物，即得到木聚糖酶。

本發明還提供上述產木聚糖酶的芽孢桿菌的篩選方法，包括以下步驟：

將樣品溶解在磷酸緩沖液中，取上清液；

將所述上清液稀釋后涂布接種于瓊脂平板生長培養基R2A，選擇直徑中等，形態邊緣整齊、中間凹陷，顏色呈灰白色的菌落；

將獲得的菌落轉接到木聚糖篩選平板培養基上培養，培養后以Gram iodine solution染色，篩選得到木聚糖酶活性最高的菌株，即為芽孢桿菌Bacillus sp.LUX8。

在本發明的一些實施例中，所述瓊脂平板生長培養基R2A含有：0.4-0.6g/L酵母提取物，0.4-0.6g/L蛋白胨，0.4-0.6g/L酪蛋白，0.4-0.6g/L葡萄糖，0.4-0.6g/L可溶性淀粉，0.2-0.4g/L磷酸氫二鉀，0.4-0.6g/L七水硫酸鎂，0.2-0.4g/L丙酮酸鈉，10.0-20.0g/L瓊脂糖。

從上面所述可以看出，本發明提供的芽孢桿菌Bacillus sp.LUX8是從動物腸胃中分離得到的，于2015年5月17日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏地點為中國.武漢.武漢大學，保藏編號為CCTCC NO:2015308。該菌株生產的木聚糖酶具有寬pH穩定性，pH 5.0～9.0范圍內相對酶活均在50％以上，具有較為穩定的木聚糖酶活性。分別用500μg/mL的胃蛋白酶、胰蛋白酶和膠原蛋白酶A，37℃處理1小時對該菌生產的木聚糖酶活性沒有顯著影響。而且，本發明提供的菌株能將木聚糖酶分泌到胞外，使其容易從培養基中提取，由此得到的木聚糖酶能夠在紙漿漂白、動物飼料、食品工業和能源工業中應用。

附圖說明

圖1為本發明實施例芽孢桿菌LUX8生產的木聚糖酶在不同反應pH下的相對酶活力；

圖2為本發明實施例芽孢桿菌LUX8生產的木聚糖酶在不同反應溫度下的相對酶活力。

具體實施方式

為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚明白，以下結合具體實施例，并參照附圖，對本發明進一步詳細說明。

實施例1芽孢桿菌的分離鑒定