[發(fā)明專利]一種砷-白蛋白螯合物及其制備方法和應用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201510412176.2
• 申請日: 2015-07-14
• 公開（公告）號: CN104987389A
• 公開（公告）日: 2015-10-21
• 發(fā)明（設計）人: 張積仁;陽帆;董欣敏;吳婧;蔡睿;孫遙;趙乙木
• 申請（專利權）人: 上海拜豪生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/22;G01N33/96;G01N33/68
• 代理公司: 廣州市越秀區(qū)哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 湯喜友

1.一種砷-白蛋白螯合物，其特征在于，砷離子與白蛋白通過巰基或/和半胱氨酸殘基螯合而成。

2.一種如權利要求1所述的砷-白蛋白螯合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

A)砷與白蛋白的螯合反應：在提純源于人體的白蛋白或按照生物學方法重組的白蛋白中加入砷離子進行螯合反應，得到反應溶液；

B)純化砷-白蛋白螯合物的提取：采用免疫親和層析法，去除反應溶液中未反應的白蛋白以及多余的砷離子，即得砷-白蛋白螯合物。

3.根據(jù)權利要求2所述的制備方法，其特征在于，

所述步驟B)具體如下：

(1)溶解樣品：向經(jīng)過步驟A)得到的反應溶液中加入生理鹽水使砷-白蛋白螯合物復溶；

(2)平衡層析柱：使用稀釋緩沖液沖洗層析柱的管路，在層析柱中裝入能與白蛋白特異性結合的填料，裝柱后，繼續(xù)使用稀釋緩沖液平衡層析柱；

(3)上樣：待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液稀釋步驟(1)中樣品，然后上柱，白蛋白與填料特異性結合；

(4)洗脫：使用稀釋緩沖液沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0.05-0.1mol/L的磷酸鹽溶液進行洗脫；

(5)收集：收集洗脫液Ⅰ；

(6)透析：將步驟(5)中的收集的洗脫液，裝透析袋，用ddH₂O透析除鹽，換水三次后，4℃透析過夜，收集樣本；

(7)平衡層析柱：采用新的層析柱，用稀釋緩沖液沖洗管路，在該層析柱中裝入能與砷特異性結合的填料，裝柱后再用稀釋緩沖液平衡層析柱；

(8)上樣：待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液稀釋步驟(6)中樣本，然后上柱；

(9)洗脫：使用稀釋緩沖液沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0.5-1.0mol/L的磷酸鹽溶液進行洗脫；

(10)收集：收集洗脫液Ⅱ；

(11)透析：將步驟(10)中的收集的洗脫液，裝透析袋，用ddH₂O透析除鹽，換水三次后，4℃透析過夜，收集樣本，即得砷-白蛋白螯合物。

4.根據(jù)權利要求2所述的砷-白蛋白螯合物的制備方法，其特征在于，還包括步驟C)：對砷-白蛋白螯合物的鑒定；

其中，步驟C)中具體如下：

(1)制備膠床：以瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠中的一種作為介質(zhì)制備膠床；

(2)加樣：取步驟B)中提取純化得到的砷-白蛋白螯合物，加入稀釋緩沖液，并混勻，然后加樣于樣品槽中；

(3)電泳：連接電泳板，進行電泳；

(4)檢測：在膠床上找出含砷的蛋白條帶，將該蛋白條帶取出并溶解，然后再采用ELISA法或ICP-MS法或AAS法檢測是否含有砷以及檢測砷的含量。

5.一種如權利要求1所述的砷-白蛋白螯合物在制備檢測血樣中砷-白蛋白螯合物的試劑或試劑盒中的應用。

6.一種至少包括如權利要求1所述的砷-白蛋白螯合物作為標準品的試劑盒。

7.根據(jù)權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，還包括包被液，該包被液含有捕獲白蛋白的物質(zhì)或捕獲砷的物質(zhì)。

8.一種定量檢測砷-白蛋白螯合物的方法，其特征在于，以已知含量的權利要求1所述的砷-白蛋白螯合物作為標準品，采用以下方法之一對樣品進行檢測：酶聯(lián)免疫法、酶聯(lián)免疫與原子吸收光譜結合法、酶聯(lián)免疫與電感耦合等離子體質(zhì)譜結合法、提純砷-白蛋白螯合物與酶聯(lián)免疫結合法、提純砷-白蛋白螯合物與原子吸收光譜結合法、提純砷-白蛋白螯合物與電感耦合等離子體質(zhì)譜結合法、電泳與酶聯(lián)免疫或原子吸收光譜或電感耦合等離子體質(zhì)譜結合法。