[發明專利]一種砷?IgG螯合物及其制備方法和應用有效
| 申請號： | 201510411518.9 | 申請日： | 2015-07-14 |
| 公開（公告）號： | CN104987405B | 公開（公告）日： | 2018-01-23 |
| 發明（設計）人： | 張積仁;陽帆;董欣敏;吳婧;蔡睿;孫遙;趙乙木 | 申請（專利權）人： | 廣東騰湃醫療投資管理有限公司 |
| 主分類號： | C07K16/00 | 分類號： | C07K16/00;C07K1/22;G01N33/96;G01N33/68 |
| 代理公司： | 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙)44288 | 代理人： | 湯喜友 |
| 地址： | 511500 廣東省清遠市清*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 igg 螯合物 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種砷-IgG螯合物在制備檢測血樣中砷-IgG螯合物的試劑或試劑盒中的應用，其特征在于，所述砷-IgG螯合物為砷離子與IgG通過巰基或/和半胱氨酸殘基螯合而成；
所述砷-IgG螯合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
A)砷與IgG的螯合反應：在人源的IgG或按照生物學方法重組的IgG中加入砷離子進行螯合反應，得到反應溶液；
B)純化砷-IgG螯合物的提取：采用免疫親和層析法，去除反應溶液中未反應的IgG以及多余的砷離子，即得砷-IgG螯合物；
C)對砷-IgG螯合物的鑒定；
其中，步驟B)具體如下：
(1)溶解樣品：向經過步驟A)得到的反應溶液中加入生理鹽水，使砷-IgG螯合物復溶；
(2)平衡層析柱：使用稀釋緩沖液沖洗層析柱的管路，在層析柱中裝入能與IgG特異性結合的填料，裝柱后，繼續使用稀釋緩沖液平衡層析柱；
(3)上樣：待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液稀釋步驟(1)中樣品，然后上柱，IgG與填料特異性結合；
(4)洗脫：使用稀釋緩沖液沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0.05-0.1mol/L的磷酸鹽溶液進行洗脫；
(5)收集：收集經過步驟(4)洗脫后的洗脫液，收集完畢后立即使蛋白復性；
(6)透析：將步驟(5)中的收集的洗脫液，裝透析袋，用ddH2O透析除鹽，換水三次后，4℃透析過夜，收集樣本；
(7)平衡層析柱：采用新的層析柱，用稀釋緩沖液沖洗管路，在該層析柱中裝入能與砷特異性結合的填料，裝柱后再用稀釋緩沖液平衡層析柱；
(8)上樣：待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液稀釋步驟(6)中樣本，然后上柱；
(9)洗脫：使用稀釋緩沖液沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0.5-1.0mol/L的磷酸鹽溶液進行洗脫；
(10)收集：收集經過步驟(9)洗脫后的洗脫液，收集完畢后立即使蛋白復性；
(11)透析：將步驟(10)中的收集的洗脫液，裝透析袋，用ddH2O透析除鹽，換水三次后，4℃透析過夜，收集樣本，即得砷-IgG螯合物；
其中，步驟C)中具體如下：
(1)制備膠床：以瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠中的一種作為介質制備膠床；
(2)加樣：取步驟B)中提取純化得到的砷-IgG螯合物，加入稀釋緩沖液，并混勻，然后加樣于樣品槽中；
(3)電泳：連接電泳板，進行電泳；
(4)檢測：在膠床上找出含砷的蛋白條帶，將該蛋白條帶取出，將蛋白條帶復溶，然后再采用ICP-MS法、AAS法或ELISA法檢測是否含有砷以及檢測砷的含量。
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