[發明專利]一種鉻-IgG螯合物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201510411419.0
• 申請日: 2015-07-14
• 公開（公告）號: CN105021551A
• 公開（公告）日: 2015-11-04
• 發明（設計）人: 張積仁;陽帆;董欣敏;吳婧;蔡睿;孫遙;趙乙木
• 申請（專利權）人: 上海拜豪生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N33/53;G01N27/62;G01N1/28;G01N27/447
• 代理公司: 廣州市越秀區哲力專利商標事務所(普通合伙) 44288
• 代理人: 湯喜友

技術領域

本發明涉及檢測領域，更具體地說，涉及一種鉻-IgG螯合物及其制備方法和應用。

背景技術

IgG主要由脾、淋巴結中的漿細胞合成和分泌，以單體形式存在。在個體發育過程中機體合成IgG的年齡要晚于IgM，在出生后第3個月開始合成，3～5歲接近成年人水平。IgG是血清中主要的抗體成分，約占血清總Ig的75％。IgG是唯一能通過胎盤的Ig，在自然被動免疫中起重要作用。此外IgG還具有調理吞噬、ADCC和結合SPA等作用。由于IgG上述特點，IgG在機體免疫防護中起著主要的作用，大多數抗菌、抗病毒、抗毒素抗體都屬于IgG類抗體。應用對麻疹、甲型肝炎等有免疫力的產婦或正常人丙種或胎盤球蛋白可進行人工被動免疫，能有郊地預防相應的傳染性疾病。

鉻(chromium，Cr)是元素周期表Ⅵ族中的一種過渡金屬，其質地堅硬，表面具有光澤，有較高的熔點，在工業生產中具有重大的經濟價值，一個世紀以來被廣泛應用，每年全球鉻生產量高達107噸，因而鉻是一種名副其實的重要金屬污染物。目前，鉻廣泛應用于電鍍、鞣革、顏料、油漆、合金、印染等各個方面，與人們的生活息息相關,但是同樣也對人類的身體健康產生巨大影響。在美國，Cr與Hg、Cd、Pb被稱為四大環境污染物。據統計，每年有幾十個億的民眾都在飲用鉻污染的水源，而在加利福利亞有高達30％的水資源都已經被鉻污染，因而鉻污染嚴重影響著人們的身體健康。

自然界中鉻主要以三價和六價的形式存在，而一般認為，三價鉻是人類所需的微量元素，而六價鉻才是明顯的毒性物質。由于六價鉻易通過細胞膜進入細胞，而且可以通過一系列反應，產生強烈的細胞毒性及基因毒性，因而普遍認為六價鉻的毒性高于三價鉻，達10—100倍。學者認為當水中的六價鉻含量超過0.05mg/L即是有毒的。六價鉻可以通過皮膚接觸、食物攝入、飲用水飲入、呼吸道吸入等途徑進入人體，對于職業性暴露人群主要是通過呼吸道吸入六價鉻灰塵，而對于普通人群則是通過飲入污染水源、食入被污染的食物、吸入等方式攝入六價鉻。六價鉻進入體內后，可以引發氧化應激、染色體畸變、細胞凋亡、多種DNA損傷(包括單鏈斷裂、DNA-蛋白質交聯、DNA-氨基酸交聯、Cr-DNA配合物形成等)，從而造成機體多處組織、器官、系統損傷。不僅如此，六價鉻還被認為是一種強有力的致癌物，早在1990年國際癌癥研究組織(International?Agency?for?Research?on?Cancer，IARC)就將六價鉻作為一種人類致癌物。關于六價鉻的細胞毒性、基因毒性、致癌性已成為當前廣泛研究的課題。

關于鉻中毒，特別是慢性鉻中毒的評價，僅能通過檢測血鉻含量，間接反應人體內的循環鉻含量，無法進一步評估鉻對于機體功能的損傷程度，而隨著科學技術的飛速發展，鉻與人體的關系也日益緊密，因而尋找一種可以從機體功能角度評價鉻中毒，特別是慢性鉻中毒對于機體的損害程度的評價方式日益重要。

發明內容

針對鉻污染嚴重的問題，本發明的目的在于提供一種鉻-IgG螯合物及其制備方法，并建立鉻-IgG螯合物的定性、定量檢測方法，以便定量檢測鉻-IgG螯合物在評價一個地區鉻污染程度的應用。通過定量檢測一個地區人群血清中鉻-IgG螯合物可以間接反映這個地區人群受鉻污染的情況，從而間接反映這個地區鉻污染程度。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：提供一種鉻-IgG螯合物，鉻離子與IgG通過巰基或/和半胱氨酸殘基螯合而成。

本發明還提供一種上述的鉻-IgG螯合物的制備方法，包括以下步驟：

A)鉻與IgG的螯合反應：在人源的IgG中加入鉻離子進行螯合反應，得到反應溶液；

B)純化鉻-IgG螯合物的提取：采用免疫親和層析法，去除反應溶液中未反應的IgG以及多余的鉻離子，即得鉻-IgG螯合物。

其中，體外合成法中所述步驟B)具體如下：

(1)溶解樣品：向經過步驟A)得到的反應溶液中加入生理鹽水，使鉻-IgG螯合物復溶；

(2)平衡層析柱：使用稀釋緩沖液沖洗層析柱的管路，在層析柱中裝入能與IgG特異性結合的填料，裝柱后，繼續使用稀釋緩沖液平衡層析柱；

(3)上樣：待層析柱平衡后，用稀釋緩沖液稀釋步驟(1)中樣品，然后上柱，IgG與填料特異性結合；

(4)洗脫：使用稀釋緩沖液沖洗層析柱至基線平衡，然后使用0.05-0.1mol/L的磷酸鹽溶液進行洗脫；

(5)收集：收集經過步驟(4)洗脫后的洗脫液，收集完畢后立即使蛋白復性；