[發明專利]一種利用線粒體DNA鑒別牛羊肉中貂肉的LAMP檢測方法

有效

• 申請號: 201510411167.1
• 申請日: 2015-07-14
• 公開（公告）號: CN105018611B
• 公開（公告）日: 2018-08-14
• 發明（設計）人: 劉少寧;陳智;高迎春;吳家強;邵兵;楊志昆;蘇梅;姚震;王貴升;程瑞紅
• 申請（專利權）人: 山東省獸藥質量檢驗所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6844
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 張菡

1.一種利用線粒體DNA鑒別牛羊肉中貂肉的LAMP檢測方法，其特征在于,以待測肉品的DNA作為模板、以DAF3、DAB3、DAFIP、DABIP為引物構建LAMP檢測體系；LAMP檢測體系于64℃恒溫水浴中反應40min，反應結束后向反應液中加入1 uL熒光染料SYBR GREEN Ⅰ；若反應液變成綠色，說明待測肉品中存在貂肉；若為橘黃色，則待測肉品中不存在貂肉；

所用引物如下：

DAF3: GCTATGGGCCTTAGGGTT，如SEQ ID NO.1所示，

DAB3: CATTTAGGGTGTAGCCTGT，如SEQ ID NO.2所示，

DAFIP:GTGAAGAACGATGTCTAGTGATGAGTTTTATTTACAGTGGGTGGC，如SEQ ID NO.3所示，

DABIP:GCACATTTTCACTACGTTCTTTCAAGGAACCAGTGAACGAATCC，如SEQ ID NO.4所示；

所述LAMP檢測體系，總體積為25uL；其組成如下

10umol/L的DAF3、DAB3各0.5uL，10umol/L 的DAFIP、DABIP各4uL，2.5mmol/L的 dNTP4uL，50mmol/L的 MgSO₄ 2uL，5mol/L的Betaine2.5uL，Bst DNA聚合酶1uL，10×Thermobuffer 2.5uL，模板2uL，余量為超純水。

2.一種利用線粒體DNA鑒別牛羊肉中貂肉的LAMP檢測方法所用檢測試劑，其特征在于,含有如下引物：

DAF3: GCTATGGGCCTTAGGGTT，如SEQ ID NO.1所示，

DAB3: CATTTAGGGTGTAGCCTGT，如SEQ ID NO.2所示，

DAFIP:GTGAAGAACGATGTCTAGTGATGAGTTTTATTTACAGTGGGTGGC，如SEQ ID NO.3所示，

DABIP:GCACATTTTCACTACGTTCTTTCAAGGAACCAGTGAACGAATCC，如SEQ ID NO.4所示。

3.一種利用線粒體DNA鑒別牛羊肉中貂肉的LAMP檢測方法所用檢測試劑盒，其特征在于,含有10umol/L的DAF3、DAB3各0.5uL，10umol/L 的DAFIP、DABIP各4uL，2.5mmol/L的dNTP 4uL，50mmol/L的 MgSO₄ 2uL，5mol/L的Betaine2.5uL，Bst DNA聚合酶1uL，10×Thermobuffer 2.5uL；

其中：

DAF3: GCTATGGGCCTTAGGGTT，如SEQ ID NO.1所示，

DAB3: CATTTAGGGTGTAGCCTGT，如SEQ ID NO.2所示，

DAFIP:GTGAAGAACGATGTCTAGTGATGAGTTTTATTTACAGTGGGTGGC，如SEQ ID NO.3所示，

DABIP:GCACATTTTCACTACGTTCTTTCAAGGAACCAGTGAACGAATCC，如SEQ ID NO.4所示。