[發明專利]一種調控基因在非分泌型腺毛中表達的啟動子及其應用

有效

• 申請號: 201510409957.6
• 申請日: 2015-07-13
• 公開（公告）號: CN105132422B
• 公開（公告）日: 2017-11-10
• 發明（設計）人: 唐克軒;石璞;付雪晴;沈乾;孫小芬;陳明慧;馬亞男;郝小龍
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/82;C12Q1/68;A01H5/00
• 代理公司: 上海旭誠知識產權代理有限公司31220
• 代理人: 鄭立

1.一種調控基因在非分泌型腺毛中表達的啟動子，其特征在于，所述啟動子為萜類合成酶基因啟動子，所述啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如權利要求1所述的一種調控基因在非分泌型腺毛中表達的啟動子，其特征在于，所述啟動子為誘導型啟動子。

3.一種如權利要求1所述的調控基因在非分泌型腺毛中表達的啟動子在青蒿生產代謝產物的基因工程育種中的應用。

4.一種調控基因在非分泌型腺毛中表達的啟動子的用途，其特征在于，所述啟動子為特異型啟動子，能夠代替組成型啟動子引導外源基因在植物非分泌型腺毛中特異表達,所述啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

5.一種載體，其特征在于，所述載體連接有如權利要求1所述的調控基因在非分泌型腺毛中表達的啟動子。

6.一種調控基因在非分泌型腺毛中表達的啟動子的制備方法，其特征在于，所述啟動子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述制備方法包括以下步驟：

步驟一、培養青蒿無菌苗；

步驟二、克隆調控基因在非分泌型腺毛中表達的啟動子基因組序列；

步驟三、分析調控基因在非分泌型腺毛中表達的啟動子上面的順式作用元件，確定所述啟動子類型；

步驟四、將克隆到的所述啟動子通過酶切連接連入pCAMBIA1391z載體中；

步驟五、將步驟四中構建好的所述載體轉化根癌農桿菌；

步驟六、將步驟五中帶有載體的根癌農桿菌穩定轉化青蒿；

步驟七、PCR檢測轉基因植株；

步驟八、確定所述啟動子所引導的GUS報告基因在植株中表達部位。

7.如權利要求6所述的一種調控基因在非分泌型腺毛中表達的啟動子的制備方法，其特征在于，所述步驟二為以基因組DNA為模板，采用兩輪巢式PCR方法擴增非分泌型腺毛特異啟動子序列。

8.如權利要求6所述的一種調控基因在非分泌型腺毛中表達的啟動子的制備方法，其特征在于，所述步驟三中調控基因在非分泌型腺毛中表達的啟動子上面的順式作用元件包括：TATA box、CAAT box、G-box、ARE、GA-motif、ATCT-motif、GARE-motif或HES。

9.如權利要求6所述的一種調控基因在非分泌型腺毛中表達的啟動子的制備方法，其特征在于，所述步驟四中，為構建pCAMBIA1391z載體，正向引物中引入PstI酶切位點，反向引物中引入NcoI酶切位點，引物序列如下所示：

1391z-proADH2-F：AACTGCAGAGTCATTGCACATGATGCTCTAAGA

1391z-proADH2-R：CATGCCATGGCTTGAGCCACTGCACCTGATTCT。

10.如權利要求6所述的一種調控基因在非分泌型腺毛中表達的啟動子的制備方法，其特征在于，所述步驟六具體包括：

1)外植體的預培養；

2)農桿菌與外植體的共培養；

3)抗性再生植株的篩選。